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kku6666

金虫 (初入文坛)

[求助] 共聚焦观察fitc-细菌,及样本处理等相关问题

我是用fitc-标记药物后,与金葡作用不同时间后(1h、2h、3h、4h、6h、8h、10h),滴到玻片制片后,上共聚焦观察药物在菌内的定位情况。
现在有几个问题,一是用pbs洗药物与菌悬液作用后的溶液,离心时转速和时间大约是多少?(这时已经作用了相应的时间);第二是,制片时我用多聚甲醛固定细菌,用量是多少?我想洗好的菌悬液10ul滴到玻片上后,再加多聚甲醛固定;第三,如果不用防荧光淬灭剂的话,固定好的片子可以放多长时间,多聚甲醛固定后不清洗对荧光有影响吗?因为固定后没有清洗玻片。而且第二天再上共聚焦,标本要过夜,会不会影响荧光强度。有哪位大神做过相关实验或对这方面懂得比较多的指点一下,万分感谢
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