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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 激光共聚焦染蛋白质染料选择？尼罗蓝、尼罗红还是FITC
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huangmingli

铁虫 (初入文坛)

[求助] 激光共聚焦染蛋白质染料选择？尼罗蓝、尼罗红还是FITC 已有1人参与

亲们，我打算用激光共聚焦显微镜观察下蛋白质和多糖复合物的微观结构，查文献说只用尼罗蓝就可以了，而且文献上所用的蛋白质和我的是一样的，可是我按照他的方法没有观察到结果，作者的蛋白质浓度是1%，我的是0.3%，我原以为可能是我的蛋白质浓度太低。可是今天看小木虫上帖子怎么说染蛋白质用FITC(异硫氰酸荧光素），我用的蛋白质是酪蛋白酸钠，求高手指点一二，呵呵，多谢多谢
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激光共聚焦显微镜 有用的~

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1楼 2013-04-17 16:22:39
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lxma

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huangmingli at 2013-05-17 08:40:56
你发现什么问题了呀？我觉得激光共聚焦不好做呀，之前做了两个样，用尼罗蓝染的蛋白质，没有荧光现象，我染了20min,不知道是染得时间不够还是别的原因，后来听师姐说应该现在普通的荧光显微镜下看到荧光后再做激光 ...

想问下，染色步骤是什么啊，尼罗红尼罗蓝直接混合然后和乳液混合吗，有特定比例嘛，有操作步骤嘛

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20楼2018-06-11 16:56:16
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普通回帖

非是非非2012

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主，我也在做这个，我看文献蛋白质是用SYPROOrange染色，多糖用尼罗红，离子区用FITC标记的植物凝集素，这两天打算开始做了，发现各种问题……
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2楼2013-05-15 16:59:56
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huangmingli

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 非是非非2012 at 2013-05-15 16:59:56
楼主，我也在做这个，我看文献蛋白质是用SYPROOrange染色，多糖用尼罗红，离子区用FITC标记的植物凝集素，这两天打算开始做了，发现各种问题……

你发现什么问题了呀？我觉得激光共聚焦不好做呀，之前做了两个样，用尼罗蓝染的蛋白质，没有荧光现象，我染了20min,不知道是染得时间不够还是别的原因，后来听师姐说应该现在普通的荧光显微镜下看到荧光后再做激光共聚焦，这样成功的概率大些，呵呵，祝我们好运呀，我马上又要重复了，呵呵。
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3楼2013-05-17 08:40:56
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非是非非2012

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by huangmingli at 2013-05-17 08:40:56
你发现什么问题了呀？我觉得激光共聚焦不好做呀，之前做了两个样，用尼罗蓝染的蛋白质，没有荧光现象，我染了20min,不知道是染得时间不够还是别的原因，后来听师姐说应该现在普通的荧光显微镜下看到荧光后再做激光 ...

不知道染多久，用多少染料，前些天顶了那三个东西到现在只有一个到了，等试剂中。打算先做个透射电镜。不过我的样品是会自发荧光的，之前去看过几次，其实看到的都是叶绿素啦，所以要染色再看到多一点东西。楼主你做成功了给我说说经验哈！
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4楼2013-05-17 10:43:57
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huangmingli

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 非是非非2012 at 2013-05-17 10:43:57
不知道染多久，用多少染料，前些天顶了那三个东西到现在只有一个到了，等试剂中。打算先做个透射电镜。不过我的样品是会自发荧光的，之前去看过几次，其实看到的都是叶绿素啦，所以要染色再看到多一点东西。楼主你 ...

好的  好的  互相帮助么  呵呵
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5楼2013-05-18 09:53:50
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rocketdog

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

Nile blue,Nile red 貌似是染脂肪的?可以试试rodamine 之类的。我也在做这方面的，互相学习哈~
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6楼2013-06-11 23:20:00
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huangmingli

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by rocketdog at 2013-06-11 23:20:00
Nile blue,Nile red 貌似是染脂肪的?可以试试rodamine 之类的。我也在做这方面的，互相学习哈~

好的  呵呵  谢谢你啦
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7楼2013-06-19 09:32:43
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豆角月儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 非是非非2012 at 2013-05-17 10:43:57
不知道染多久，用多少染料，前些天顶了那三个东西到现在只有一个到了，等试剂中。打算先做个透射电镜。不过我的样品是会自发荧光的，之前去看过几次，其实看到的都是叶绿素啦，所以要染色再看到多一点东西。楼主你 ...

想问一下你的样品发什么颜色的荧光呢？最后用的什么染的蛋白质呢？
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8楼2013-08-06 16:20:47
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huangmingli

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 豆角月儿 at 2013-08-06 16:20:47
想问一下你的样品发什么颜色的荧光呢？最后用的什么染的蛋白质呢？...

Nile Blue染蛋白质，应该是发红光吧，Nile Red染的是脂肪，应该发红光，我做得实验没有现象。是不是对染料的溶解有要求呢？我都是用水直接溶的，你做过么？
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9楼2013-08-16 08:52:35
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515644

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by huangmingli at 2013-08-16 08:52:35
Nile Blue染蛋白质，应该是发红光吧，Nile Red染的是脂肪，应该发红光，我做得实验没有现象。是不是对染料的溶解有要求呢？我都是用水直接溶的，你做过么？...

我记得尼罗红遇水分解，你的都分解掉了。多找些方法，或者找回说明书看看，我的用户是拿尼罗红染脂类，效果非常漂亮。
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10楼2013-10-12 09:27:18
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