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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 抗原-抗体反应的问题
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铁甲威虫

银虫 (正式写手)

[求助] 抗原-抗体反应的问题 已有1人参与

各位大侠，小弟在溶液中进行抗原-抗体反应，查资料显示PEG-6000可以促进该反应，请问一般PEG-6000的浓度一般为多少呢？还有BSA可以保护我的抗体，那么一般BSA的浓度为多少适宜？？？？？
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1楼 2014-06-09 20:03:02
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
铁甲威虫: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-06-09 22:03:20
铁甲威虫: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-06-10 20:54:31
BSA的浓度可以在0.1%~5%，我一般用1%。至于PEG-6000用多大浓度如果有文献就参照文献上说的，没有文献的话就自己做一系列的梯度检测一下看看哪个浓度效果好。
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2楼2014-06-09 21:15:16
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 铁甲威虫 at 2014-06-09 21:16:45
请教一个低级问题，BSA可以用牛白蛋白代替吗？...

BSA是牛血清白蛋白，你说的牛白蛋白是？
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4楼2014-06-09 21:31:12
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 铁甲威虫 at 2014-06-10 20:17:03
小弟在做体外诊断试剂，R1和R2（乳胶增强免疫比浊发）都是外国进口的，但是老板说太贵了，能不能自配R1降低成本，配方是小弟想的，自己不是对这方面很熟，不知道如何入手，抗原和抗体的比例有说明书，应该何当的。...

那就先把吐温浓度降下来，10g/L的NaCl换成0.01 M pH7.4的PBS，再试下看有没有沉淀。
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铁甲威虫
12楼2014-06-10 20:33:12
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 铁甲威虫 at 2014-06-10 20:54:18
好感谢你啊！大侠能不介绍一下这方面的书籍或者资料，刚刚入行不是很懂...

你可以看一下免疫学实验技术方面的书，最好的办法是看与你所做研究相关的文献。我之前的研究主要是ELISA方向的，所以也只能对你实验中的问题提出比较基础的见解。
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14楼2014-06-11 08:36:48
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铁甲威虫

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-09 21:15:16
BSA的浓度可以在0.1%~5%，我一般用1%。至于PEG-6000用多大浓度如果有文献就参照文献上说的，没有文献的话就自己做一系列的梯度检测一下看看哪个浓度效果好。

请教一个低级问题，BSA可以用牛白蛋白代替吗？
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3楼2014-06-09 21:16:45
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铁甲威虫

银虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-09 21:31:12
BSA是牛血清白蛋白，你说的牛白蛋白是？...

实验室有一瓶牛白蛋白，不知道是不是跟牛血清白蛋白有所不同。
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5楼2014-06-09 22:00:40
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铁甲威虫

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-09 21:31:12
BSA是牛血清白蛋白，你说的牛白蛋白是？...

还有1%BSA浓度大概为10g/L吧？
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6楼2014-06-09 22:02:30
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 铁甲威虫 at 2014-06-09 22:02:30
还有1%BSA浓度大概为10g/L吧？...

是的
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7楼2014-06-10 08:50:51
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 铁甲威虫 at 2014-06-09 22:00:40
实验室有一瓶牛白蛋白，不知道是不是跟牛血清白蛋白有所不同。...

你可以拍个照片给我看看
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8楼2014-06-10 08:51:24
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铁甲威虫

银虫 (正式写手)
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8楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-10 08:51:24
你可以拍个照片给我看看...

大侠，麻烦你看看我下面的配方，抗体在这个反应液中反应，而抗原在临床的血清中，把血清和抗体液加到反应液中，发现无反应。不知道为什，觉得是PEG-6000的量不够。

反应液：
0.5mol/L Tris 缓冲液

PEG-6000 10g/L

BSA      10g/L

吐温-20  20g/L

氯化钠   10g/L

叠氮钠   0.5g/L

PH为8.33
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9楼2014-06-10 19:04:48
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 铁甲威虫 at 2014-06-10 19:04:48
大侠，麻烦你看看我下面的配方，抗体在这个反应液中反应，而抗原在临床的血清中，把血清和抗体液加到反应液中，发现无反应。不知道为什，觉得是PEG-6000的量不够。

反应液：
0.5mol/L Tris 缓冲液

PEG-6000 ...

你是想做免疫沉淀？就反应液来看吐温的浓度过高了，一般用到0.05%，你这个反应液配方是从哪得来的？另外抗原抗体反应是否能沉淀和多种因素有关，最主要的是抗原和抗体的比例要适当，还有就是抗体的种类，是单抗的话难以产生沉淀。不知你的实验目的是什么？检测抗原？
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10楼2014-06-10 20:07:36
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