24小时热门版块排行榜    

查看: 1647  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

伊梦青lhq

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增跑胶 已有2人参与

各位大虾,求助啦!
我用提取的RNA进行反转录,然后用所得的cDNA进行PCR扩增。分别扩增了3个基因,c-myc,β-actin和hTERT,其中c-myc和β-actin都可以跑出条带,只有hTERT没有条带,做了三次,结果都是空白,胶上什么都没有,这是怎么回事,问题出在哪呢?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 伊梦青lhq at 2014-06-21 11:26:15
根据您的建议,我做了退火梯度,温度分别是55,56,57,58,59,60,
20ul反应体系,反应条件是:94度 1min;(94度 30sec,53度 30 sec,72度 2min)*34个循环;72度 10min,并换了一种dNTP mixture ,由于之前跑的没有条 ...

条带是否是200多bp(目的条带位置)?点个marker看一下marker跑得怎样。
20楼2014-06-21 13:21:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
伊梦青lhq: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 学习了! 2014-06-11 10:39:41
你用的什么组织或细胞提的RNA?可能是引物出了问题?
2楼2014-06-09 18:30:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伊梦青lhq

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-09 18:30:28
你用的什么组织或细胞提的RNA?可能是引物出了问题?

HepG2 人肝癌细胞,其他的两个基因都可以跑出条带来的。
3楼2014-06-09 19:43:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 伊梦青lhq at 2014-06-09 19:43:20
HepG2 人肝癌细胞,其他的两个基因都可以跑出条带来的。...

检查一下引物的序列
4楼2014-06-09 20:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见