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[求助]
PCR扩增跑胶 已有2人参与
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各位大虾，求助啦！ 我用提取的RNA进行反转录，然后用所得的cDNA进行PCR扩增。分别扩增了3个基因，c-myc，β-actin和hTERT，其中c-myc和β-actin都可以跑出条带，只有hTERT没有条带，做了三次，结果都是空白，胶上什么都没有，这是怎么回事，问题出在哪呢？ |
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根据您的建议，我做了退火梯度，温度分别是55,56,57,58,59,60， 20ul反应体系，反应条件是：94度 1min；（94度 30sec,53度 30 sec,72度 2min)*34个循环;72度 10min，并换了一种dNTP mixture ，由于之前跑的没有条带，我就稍稍增大了点模板量，由原来4ul/25ui增加为4ul/20ui跑胶结果就是上图。 hTERT F1 Tm=60.0度 R1 Tm=61.9度 高兴的是它有条带了，但是结果不好，有弥散，只有退火温度在55,56时条带还比较明显。 我用的是TAE浓缩液差不多一年了，稀释后跑胶。 Mg离子是包含在试剂盒的buffer中，不是另外添加的。 高手帮忙再指导一下，是什么原因呢？谢谢啦！  20140621112523.jpg |
19楼2014-06-21 11:26:15
逍潇
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2楼2014-06-09 18:30:28
3楼2014-06-09 19:43:20
逍潇
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4楼2014-06-09 20:37:12