| 查看: 1936 | 回复: 19 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
PCR扩增跑胶 已有2人参与
|
|||
|
各位大虾，求助啦！ 我用提取的RNA进行反转录，然后用所得的cDNA进行PCR扩增。分别扩增了3个基因，c-myc，β-actin和hTERT，其中c-myc和β-actin都可以跑出条带，只有hTERT没有条带，做了三次，结果都是空白，胶上什么都没有，这是怎么回事，问题出在哪呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有15人回复
-
科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题
已经有14人回复
-
要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够
已经有17人回复
-
基金系统什么内容也没有
已经有10人回复
-
学科评审组评审是指会评吗？
已经有5人回复
-
面上合作单位盖章
已经有9人回复
-
面上函评意见出来了，像什么等级？
已经有17人回复
-
小白求助 投论文要求的highlights应该如何写
已经有4人回复
|
根据您的建议，我做了退火梯度，温度分别是55,56,57,58,59,60， 20ul反应体系，反应条件是：94度 1min；（94度 30sec,53度 30 sec,72度 2min)*34个循环;72度 10min，并换了一种dNTP mixture ，由于之前跑的没有条带，我就稍稍增大了点模板量，由原来4ul/25ui增加为4ul/20ui跑胶结果就是上图。 hTERT F1 Tm=60.0度 R1 Tm=61.9度 高兴的是它有条带了，但是结果不好，有弥散，只有退火温度在55,56时条带还比较明显。 我用的是TAE浓缩液差不多一年了，稀释后跑胶。 Mg离子是包含在试剂盒的buffer中，不是另外添加的。 高手帮忙再指导一下，是什么原因呢？谢谢啦！  20140621112523.jpg |
19楼2014-06-21 11:26:15
逍潇
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 45 (小学生)
- 金币: 5442.1
- 散金: 20
- 红花: 6
- 帖子: 1137
- 在线: 385.6小时
- 虫号: 487765
- 注册: 2007-12-28
- 性别: MM
- 专业: 化学环境污染与健康
2楼2014-06-09 18:30:28
3楼2014-06-09 19:43:20
逍潇
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 45 (小学生)
- 金币: 5442.1
- 散金: 20
- 红花: 6
- 帖子: 1137
- 在线: 385.6小时
- 虫号: 487765
- 注册: 2007-12-28
- 性别: MM
- 专业: 化学环境污染与健康
4楼2014-06-09 20:37:12
30