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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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shellyxss

金虫 (正式写手)

[求助] 做过反向PCR的筒子进来看一下吧 已有1人参与

我在做反向PCR是时候,方法里面说自身环化以后需要用乙醇沉淀环化产物,这个乙醇沉淀是怎么沉淀的啊?麻烦知道的筒子告知一下呗~谢谢各位啦~
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shellyxss

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-01 21:20:27
就是传统的DNA浓缩。向1体积的质粒溶液加入2.5体积冰置或者-20度放置的无水乙醇,再加入0.1倍 3M、pH5.2醋酸钠溶液,之后将混合液-20度静置30min以上(网上也有-70度放3min,不过我没试过),12000rpm   下4度 离心10 ...

请问为什么需要用醋酸钠溶液啊?
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3楼2014-06-02 15:50:15
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
就是传统的DNA浓缩。向1体积的质粒溶液加入2.5体积冰置或者-20度放置的无水乙醇,再加入0.1倍 3M、pH5.2醋酸钠溶液,之后将混合液-20度静置30min以上(网上也有-70度放3min,不过我没试过),12000rpm   下4度 离心10min,小心弃去液体,之后再用75%乙醇漂洗一遍,12000rpm离心弃去乙醇后,真空干燥或者室温静置晾干残余乙醇,最后用一定体积的水或缓冲液溶解即可。
大家相互帮助哈
2楼2014-06-01 21:20:27
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shellyxss

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-01 21:20:27
就是传统的DNA浓缩。向1体积的质粒溶液加入2.5体积冰置或者-20度放置的无水乙醇,再加入0.1倍 3M、pH5.2醋酸钠溶液,之后将混合液-20度静置30min以上(网上也有-70度放3min,不过我没试过),12000rpm   下4度 离心10 ...

啊,还有配置的醋酸钠溶液是不是需要高压蒸汽灭菌呢?
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4楼2014-06-02 16:10:29
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luwei13566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by shellyxss at 2014-06-02 15:50:15
请问为什么需要用醋酸钠溶液啊?...

醋酸钠中的钠离子可以中和掉你DNA上的负电荷从而促进DNA的相互聚集从而促进沉淀。
大家相互帮助哈
5楼2014-06-02 16:24:03
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