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yxh710

金虫 (小有名气)

[求助] 制备型HPLC走出的峰形很奇怪,求帮助 已有2人参与

制备型的HPLC走从分子筛下来的分子量10000左右粗品蛋白,流动相甲醇和水(含0.1%的TFA),C18柱,B相5%-90%全梯度洗脱30min的如图片1,接着又从20%-95%梯度洗脱20min,如图片2,检测波长为214nm和280nm 走出来的峰形很奇怪,90%以后应该是没有东西出来,可是214nm一直都能检测到峰形,是由于基线比较漂的原因,还是跟流动相甲醇有关系,又或者其他的原因?求指导

制备型HPLC走出的峰形很奇怪,求帮助
图片1.jpg


制备型HPLC走出的峰形很奇怪,求帮助-1
2.jpg
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有时候你生活里最想要的东西一直在你身边,可是到最后,发现也晚了
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炜少

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
费姚永芬: 金币+2 2014-05-30 13:03:23
yxh710: 金币+3, 有帮助 2014-06-05 14:12:40
记得这个分子太大 好像是用分子筛色谱柱而不是C18
Whenthepainyoufeelsad,itisbesttolearnwhatthings.Learningwillmakeyouforeverremaininvincible.
2楼2014-05-29 15:54:20
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sepax-Dr.G

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yxh710: 金币+2, 有帮助 2014-06-05 14:12:46
我也感觉你这个是你柱子的选择问题,理论上C18制备柱确实可以做蛋白,但是都是小分子的蛋白,你这个都大于10KD了
我宁愿被雨打风吹日晒,被大漠风沙伤害,把心暴露在阳光下对你表白
3楼2014-05-29 17:31:45
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