应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 做TA克隆的时候，用什么做阴性对照
52/1返回列表
查看: 2371  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lmc2537

铜虫 (小有名气)

[求助] 做TA克隆的时候，用什么做阴性对照

向老外要了个目的DNA的质粒，是用TA克隆做的，连带载体也给我寄过来了（这里要感谢老外，真的很友好，直接寄FEDEX过来），两个质粒我都转化了，且能抽出质粒，后面想想不对劲，TA克隆用的载体不是线性的吗？怎么也能够转化呢？不解？目的DNA的质粒我测过序了，的确是包含TA克隆载体的目的DNA质粒，但是载体没有送去测序。这里希望大家能够解答，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-05-26 19:42:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmc2537

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 白菜吃虫 at 2014-05-30 12:44:55
rol:我觉得你可能是没弄清楚做阴性对照的目的是啥。不加入任何DNA，只有细菌的，目的是检测抗生素是否有效；加入只有T载体的线性化片段，目的是检测载体的线性化情况，你的目的片段板上是否长了假阳性。
阴性对照 ...

我大致明白你的意思了，可能我没表达清楚，不好意思，我说的阴性对照是指将来转染细胞的时候用来做对照的，即没有连DNA的质粒载体转染到293T细胞里面。
赞一下 回复此楼
13楼2014-05-30 15:05:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

antibodyknow

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 14:18:54
购买的TA克隆载体的确是线性化，但当把目的基因克隆至载体后，将成为环状质粒了。老外送给你的质粒应该是鉴定正确的单克隆质粒，制备的质粒DNA当然是超螺旋环状DNA,自然能够转化进感受态细胞
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-26 22:13:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmc2537

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by antibodyknow at 2014-05-26 22:13:49
购买的TA克隆载体的确是线性化，但当把目的基因克隆至载体后，将成为环状质粒了。老外送给你的质粒应该是鉴定正确的单克隆质粒，制备的质粒DNA当然是超螺旋环状DNA,自然能够转化进感受态细胞

我的意思是没有连目的基因的质粒怎么也能转化？（老外在一张滤纸上画了两个圈一个是连有目的基因的，一个是没有连的）
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-27 09:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 14:19:01
lmc2537: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-05-29 08:42:17
你再仔细看看目的片段的插入位点在哪里，仔细观察插入位点附近的碱基，看看是否是TA克隆。我们一般购买的克隆载体也是从环状的质粒经过处理后得到的线性片段。
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-27 13:14:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭