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做TA克隆的时候，用什么做阴性对照
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| 向老外要了个目的DNA的质粒，是用TA克隆做的，连带载体也给我寄过来了（这里要感谢老外，真的很友好，直接寄FEDEX过来），两个质粒我都转化了，且能抽出质粒，后面想想不对劲，TA克隆用的载体不是线性的吗？怎么也能够转化呢？不解？目的DNA的质粒我测过序了，的确是包含TA克隆载体的目的DNA质粒，但是载体没有送去测序。这里希望大家能够解答，谢谢！ |
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【答案】应助回帖
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lmc2537: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-05-30 15:03:03
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-06-13 11:19:46
lmc2537: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-05-30 15:03:03
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-06-13 11:19:46
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rol:我觉得你可能是没弄清楚做阴性对照的目的是啥。不加入任何DNA，只有细菌的，目的是检测抗生素是否有效；加入只有T载体的线性化片段，目的是检测载体的线性化情况，你的目的片段板上是否长了假阳性。 阴性对照是直接用你买来的T载体线性片段，操作上，除了不加入自己的目的DNA，其它操作与加入目的DNA的完全一样。理论上不应该长菌；如果长了，就说明线性化片段里面混有环状的DNA，说明你的目的片段板上可能有假阳性。 阴性对照绝对不能转环状的质粒，那就不叫阴性对照了，就成阳性对照了。 话说我从来不做阴性对照，阳性对照什么的，只要有我要的目的基因就好，弄那么多也没用。 也不知道我说清楚了没有。 |
12楼2014-05-30 12:44:55
antibodyknow
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 8 (幼儿园)
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- 虫号: 3131806
- 注册: 2014-04-12
- 专业: 抗体工程学
2楼2014-05-26 22:13:49
3楼2014-05-27 09:39:14
4楼2014-05-27 13:14:16