24小时热门版块排行榜

返回列表

红卫大兵

木虫 (正式写手)

应助: 177 (高中生)
金币: 1875.1
散金: 174
红花: 8
帖子: 358
在线: 167.5小时
虫号: 2147864
注册: 2012-11-26
性别: GG
专业: 植物进化生物学

[求助] 加酶切位点已有1人参与

我要克隆一个基因，需要两边加上酶切位点，是不是每对引物都要在5端前加上酶切位点以及保护碱基？谢谢

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2014-05-24 12:07:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

MolEPI: 2
应助: 682 (博士)
金币: 6507
散金: 2025
红花: 95
帖子: 1559
在线: 801.6小时
虫号: 1427240
注册: 2011-10-04
性别: GG
专业: 植物生理与生化

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
红卫大兵: 金币+1 2014-05-24 13:19:35
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-24 20:42:07

确定好酶切位点后，分别在你的上游引物、下游引物5‘端添加保护碱基及酶切位点，在计算引物Tm值时不用考虑保护碱基及酶切位点序列，只需要根据你的引物中的匹配部分计算。此外加酶切位点时，根据你的载体类型及酶切位点所在的读码框，经常还需要考虑读码框的问题，避免出现基因插入后发生移码不能正确表达出目标蛋白的问题。

赞一下

回复此楼

2楼2014-05-24 13:10:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

红卫大兵

木虫 (正式写手)

应助: 177 (高中生)
金币: 1875.1
散金: 174
红花: 8
帖子: 358
在线: 167.5小时
虫号: 2147864
注册: 2012-11-26
性别: GG
专业: 植物进化生物学

引用回帖:

2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-05-24 13:10:14
确定好酶切位点后，分别在你的上游引物、下游引物5‘端添加保护碱基及酶切位点，在计算引物Tm值时不用考虑保护碱基及酶切位点序列，只需要根据你的引物中的匹配部分计算。此外加酶切位点时，根据你的载体类型及酶切 ...

谢谢，也就是说一对引物前面加上你需要的酶切位点就行吧？

赞一下

回复此楼

3楼2014-05-24 13:19:22

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖