应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 加酶切位点
41/1返回列表
查看: 872  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

红卫大兵

木虫 (正式写手)

[求助] 加酶切位点 已有1人参与

我要克隆一个基因，需要两边加上酶切位点，是不是每对引物都要在5端前加上酶切位点以及保护碱基？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-05-24 12:07:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
红卫大兵: 金币+1 2014-05-24 13:19:35
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-24 20:42:07
确定好酶切位点后，分别在你的上游引物、下游引物5‘端添加保护碱基及酶切位点，在计算引物Tm值时不用考虑保护碱基及酶切位点序列，只需要根据你的引物中的匹配部分计算。此外加酶切位点时，根据你的载体类型及酶切位点所在的读码框，经常还需要考虑读码框的问题，避免出现基因插入后发生移码不能正确表达出目标蛋白的问题。
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-24 13:10:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红卫大兵

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-05-24 13:10:14
确定好酶切位点后，分别在你的上游引物、下游引物5‘端添加保护碱基及酶切位点，在计算引物Tm值时不用考虑保护碱基及酶切位点序列，只需要根据你的引物中的匹配部分计算。此外加酶切位点时，根据你的载体类型及酶切 ...

谢谢，也就是说一对引物前面加上你需要的酶切位点就行吧？
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-24 13:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2014-05-24 13:19:22
谢谢，也就是说一对引物前面加上你需要的酶切位点就行吧？...

对，上下游引物5‘端分别加上1个相应的酶切位点。
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-24 13:21:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 红卫大兵 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 6/300 2026-04-19 13:00 by Aaron_zyn
[考研] 求调剂 +5 苦命人。。。 2026-04-18 6/300 2026-04-19 12:04 by 手机用户
[考研] 327求调剂 +27 Xxjc1107. 2026-04-13 30/1500 2026-04-19 08:22 by cuisz
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 生物学调剂 +10 纸扇zhishan 2026-04-13 10/500 2026-04-18 21:19 by zqndavala
[考研] 22408 312求调剂 +24 门路摸摸 2026-04-14 26/1300 2026-04-18 13:04 by wunaiy88
[考博] 申博/考博 +3 啃面包的小书虫 2026-04-17 4/200 2026-04-17 23:54 by 阳阳阳^_^
[考研] 304求调剂 +7 castLight 2026-04-16 7/350 2026-04-17 20:05 by 关一盏灯cd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 294求调剂 +7 淡然654321 2026-04-17 8/400 2026-04-17 16:36 by wutongshun
[考研] 一志愿沪9，生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-16 15:18 by jiahl2024
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 7/350 2026-04-16 14:31 by zhouxiaoyu
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭