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forlovefang

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神!DNA-PAGE一直出现问题,不知道什么原因,请求大神回复帮忙解决。 已有5人参与

我的PCR产物纯化之后,大小150bp左右,跑了个DNA-page,结果跑胶途中看到胶孔两边拖带,照胶,marker也出现两边拖带,跑了几次,每次都是换全新的TBE、APS,胶板也洗的很干净,每次都出现这个问题,不知道是什么原因,请知道的大神帮忙解决一下,万分感谢。

求助大神!DNA-PAGE一直出现问题,不知道什么原因,请求大神回复帮忙解决。
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求助大神!DNA-PAGE一直出现问题,不知道什么原因,请求大神回复帮忙解决。-1
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youlinglyw

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【答案】应助回帖


forlovefang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-10 20:51:12
感觉初始的时候压缩的不太好,所以后来跑的时候就会出现两边的带。先低电压然后高电压
天行健
8楼2014-06-07 23:29:49
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普通回帖

forlovefang

新虫 (初入文坛)

自顶一记,机器人根本不管用
2楼2014-05-21 16:30:52
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谁呀你是谁呀

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
forlovefang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-22 19:21:34
上样buffer是不是用很久了,在加点儿甘油试试;另外TBE是不是有沉淀了?
等等等等
3楼2014-05-21 20:12:04
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forlovefang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 谁呀你是谁呀 at 2014-05-21 20:12:04
上样buffer是不是用很久了,在加点儿甘油试试;另外TBE是不是有沉淀了?

loading buffer是新的,TBE也是新配的,试剂什么的都是新配的
4楼2014-05-22 10:52:22
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OlivarD

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
电压太高了,跑太快了
5楼2014-05-22 16:22:34
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forlovefang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by OlivarD at 2014-05-22 16:22:34
电压太高了,跑太快了

一直是最低电压,80V跑的啊
6楼2014-05-22 19:21:01
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by forlovefang at 2014-05-22 19:21:01
一直是最低电压,80V跑的啊...

一般来说,marker除了能检测DNA的分子质量外,还可以侧面反应你的胶是否制的成功,建议测一下TBE的pH。
7楼2014-06-07 22:37:58
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forlovefang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-06-07 23:29:49
感觉初始的时候压缩的不太好,所以后来跑的时候就会出现两边的带。先低电压然后高电压

好像确实是这个原因,那怎么样才能压缩好啊?电压80V已经是最低电压了
9楼2014-06-10 16:28:04
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youlinglyw

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一匡天下

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【答案】应助回帖


forlovefang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 20:45:26
引用回帖:
9楼: Originally posted by forlovefang at 2014-06-10 16:28:04
好像确实是这个原因,那怎么样才能压缩好啊?电压80V已经是最低电压了...

我们用的电泳仪倒是可以调电压
就是那种跑琼脂糖电泳用的电泳仪
天行健
10楼2014-06-10 17:50:12
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