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跪求PCR大神，解决小弟问题，都一个多月了，快被折腾死了 已有4人参与
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做两个酶的克隆表达，克隆，测序，都没问题， 然后设表达引物，用的Pet28a，酶切位点：1号 （ NCO1 和Xho1 ） 2号 （Nhe1和Xho1） 双酶切，验证，（两个酶都是2500多bp），条带位置正确，载体条带也正确（单酶切实验过，都能切开） 然后：问题来了，就做链接，还做了3种比例的链接，用BL21感受态， 挑菌，菌落PCR，要是没连上吧，应该是250bp的一段，要是连上了，应该就是和我的目的片段2500差不多， 可是，条带偏偏是2000不到，去测序 ，结果是：结果显示，测序没有信号或信号微弱，测序结果不可用，我们将终止此反应。建议您重新检测模板和（或）更换引物后，重新测序。 这怎么回事啊，我2500的条带放进去连接，怎么连出来的不是目的条带，里面就：双酶切后的目的基因，28a，T4buffer，T4酶，就没有了啊 附图，分别是第一个和第二个的菌落PCR，通用引物扩的  222.jpg  111111.jpg |
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兄弟拜错神了，你的问题不是PCR大神能解决的，你的PCR做的很好嘛 
2楼2014-05-20 19:45:54
zhaodahe
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8楼2014-05-23 10:10:16