应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 新手做荧光定量PCR几个疑问求解答！！
52/1返回列表
查看: 3064  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

梦梦神

新虫 (初入文坛)

[求助] 新手做荧光定量PCR几个疑问求解答！！ 已有4人参与

1.绝对定量标曲一般是做克隆通过重组质粒构建起来，但有的文献标准品直接用普通PCR产物纯化后来做成标曲，后者方法简单但是不是有什么缺陷啊？？没做过克隆的想偷懒用后面的方法做标曲啊！！求指点。
2.标准品拷贝数是根据浓度计算出来的对吧？这个浓度要用什么仪器测呢？
3.如果做相对定量，细菌的内参基因（管家基因？持家基因？）一般用什么啊，跟绝对定量相比两者哪个更方便或更可信？
PS：本人实验目的是看不同时期基因表达量，我觉得两种方法都能满足需求，求指点！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-05-17 11:36:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 梦梦神 at 2014-05-22 13:11:43
咦？是OD260还是280？...

260
11楼2014-05-22 18:04:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-19 00:05:07
梦梦神: 金币+5 2014-05-22 13:21:05
ΔΔct法 相对定量就行了啦，前提是保证引物的扩增效率，一般直接从文献里面拿，验证好了就可以用了
赞一下 回复此楼
ControlMyself
2楼2014-05-18 11:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦梦神

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 爱睡猪 at 2014-05-18 11:37:32
ΔΔct法 相对定量就行了啦，前提是保证引物的扩增效率，一般直接从文献里面拿，验证好了就可以用了

相对定量不知道该用哪个内参，很多文献都做的绝对定量，然后相对定量的也没提内参，求指点！
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-18 22:53:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
通过OD280测DNA浓度，单位μg或ng
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-19 09:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭