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chenyuanli

木虫 (小有名气)

[求助] 凝胶色谱分离蛋白问题 已有1人参与

大家好:
       最近在用SEC-150分子筛分离血浆蛋白,该分子筛的分离范围为500 - 150,000,目的蛋白分子量为180K,重要杂蛋白为66K和40K左右,我大概计算了一下柱体积约为14.3ml,柱床体积约为5.1ml,也就是说分离体积为9.2ml。理论上说,目的蛋白应该在洗脱5.1ml时出现,而主要杂蛋白应该在洗脱5.1ml之后的某时间点分别出现。但是问题出来了,总是在洗脱5.1ml之后出现一个大峰,调整了几次流速,分别为0.35ml/min、0.5ml/min、1.0ml/min,流动相为150mM磷酸盐溶液。求大牛解释。
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Davie_Meagen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
chenyuanli: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-05-14 14:30:59
上样的体积是多少呢,建议0.5ml上样量试一下。
还有你的柱效怎么样呢?柱效不好分离效果就差。
建议用1%丙酮先测一下柱效。
2楼2014-05-14 12:38:48
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chenyuanli

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Davie_Meagen at 2014-05-14 12:38:48
上样的体积是多少呢,建议0.5ml上样量试一下。
还有你的柱效怎么样呢?柱效不好分离效果就差。
建议用1%丙酮先测一下柱效。

我用的HPLC进行分析的,进样体积为20uL,色谱柱也是购买外面的,至于柱效确实没测过,我觉得生产厂家的色谱柱应该问题不大,我觉得有可能是因为蛋白产生聚集,但是我不知道过分子筛时,流动相是否需要加入什么特定的溶剂,防止在分离过程中产生聚集现象?求甚解!谢谢
嘻哈哈
3楼2014-05-14 14:30:46
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