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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 求问线粒体分离纯度检测的操作步骤
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recl

铁虫 (初入文坛)

[交流] 求问线粒体分离纯度检测的操作步骤 已有2人参与

各位大侠，最近我在做线粒体分离，想在进行下一步之前确认自己分离的纯度如何。看文献上写的好像是用VDAC和F-actin来分别代表线粒体和胞浆蛋白。之前虽然看到有人在小木虫上问过相关问题，但是因为我完全是生物入门，也不知道究竟应该怎么来测这个东西，都应该买些什么试剂。不知道各位能不能给个比较详细的protocol。跪谢！
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1楼 2014-05-07 09:13:33
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recl

铁虫 (初入文坛)
如果只做凝胶电泳之后染色的话，细胞里各种蛋白是不是干扰较大？要用特定的荧光免疫手段么？
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2楼2014-05-07 14:40:54
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匿名

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3楼2014-05-07 22:54:09
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recl

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by anytime_ml at 2014-05-07 22:54:09
你分离的是动物线粒体还是植物线粒体?还是从培养的细胞中提取线粒体?VDAC是线粒体上的一种蛋白质.

是从培养的细胞中提取线粒体。我看文献上用VDAC和F-actin来表征分离之后线粒体胞浆分别的纯度
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4楼2014-05-08 00:03:34
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匿名

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5楼2014-05-08 00:37:50
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CasGene

铜虫 (初入文坛)
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多看文献，看你这个问题就知道你很多东西还不明白。

通过密度梯度离心。

对不同的fraction测活性，如线粒体特有的活性，溶酶体体特有的活性。

或者跑western，用不同细胞器特有的蛋白抗体来看。

这样才能知道哪个fraction含有什么细胞器。

sigma有个kit.
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6楼2014-05-11 14:03:32
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recl

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by CasGene at 2014-05-11 14:03:32
多看文献，看你这个问题就知道你很多东西还不明白。

通过密度梯度离心。

对不同的fraction测活性，如线粒体特有的活性，溶酶体体特有的活性。

或者跑western，用不同细胞器特有的蛋白抗体来看。

这样才 ...

请问是什么类型的试剂盒？能给个名字或链接不？
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7楼2014-05-14 11:08:09
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CasGene

铜虫 (初入文坛)
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引用回帖:
7楼: Originally posted by recl at 2014-05-14 11:08:09
请问是什么类型的试剂盒？能给个名字或链接不？...

http://www.sigmaaldrich.com/chin ... -isolation-kit.html
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8楼2014-05-15 08:33:10
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