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recl

铁虫 (初入文坛)

[交流] 求问线粒体分离纯度检测的操作步骤 已有2人参与

各位大侠,最近我在做线粒体分离,想在进行下一步之前确认自己分离的纯度如何。看文献上写的好像是用VDAC和F-actin来分别代表线粒体和胞浆蛋白。之前虽然看到有人在小木虫上问过相关问题,但是因为我完全是生物入门,也不知道究竟应该怎么来测这个东西,都应该买些什么试剂。不知道各位能不能给个比较详细的protocol。跪谢!
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CasGene

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
多看文献,看你这个问题就知道你很多东西还不明白。

通过密度梯度离心。

对不同的fraction测活性,如线粒体特有的活性,溶酶体体特有的活性。

或者跑western,用不同细胞器特有的蛋白抗体来看。

这样才能知道哪个fraction含有什么细胞器。

sigma有个kit.
6楼2014-05-11 14:03:32
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recl

铁虫 (初入文坛)

如果只做凝胶电泳之后染色的话,细胞里各种蛋白是不是干扰较大?要用特定的荧光免疫手段么?
2楼2014-05-07 14:40:54
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匿名

用户注销 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
3楼2014-05-07 22:54:09
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recl

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by anytime_ml at 2014-05-07 22:54:09
你分离的是动物线粒体还是植物线粒体?还是从培养的细胞中提取线粒体?VDAC是线粒体上的一种蛋白质.

是从培养的细胞中提取线粒体。我看文献上用VDAC和F-actin来表征分离之后线粒体胞浆分别的纯度
4楼2014-05-08 00:03:34
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