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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 综合其他 » EDC/ sulfo-NHS 催化下脂质体连接抗体
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michaelzang

木虫 (小有名气)

[求助] EDC/ sulfo-NHS 催化下脂质体连接抗体 已有1人参与

小虫，最近在做脂质体连接抗体的实验，实验效果一直不理想，想到小木虫牛人多，希望大家不吝指教。
制备了长循环脂质体，其中PEG端有羧基，利用羧基与抗体的-NH2 连接。
查阅文献说是在EDC与sulfo NHS催化下，反应良好。现把步骤列在下面，希望各位指出问题所：
1、 取脂质体悬液300 ul, 加入EDC 0.4mg 或 0.8 mg, sulfo NHS 1.1 mg 室温搅拌 15 min 后，将 1mg/ml 的 蛋白溶液 83 ul 加入上述溶液，搅拌过夜。
2、取上述反应液20 ul 加入 SDS PAGE 5*loading buffer 5 ul 煮沸 5 min ,上样，电泳后，考马斯亮蓝染色，脱色后观察条带位置。
这是问题就出来了，单纯的抗体与 理论上连接的抗体条带位置是一样的，我就不知道是连上了没测出来，还是根本就没连上。此外还有图片一张，可能是连上的
3. 但是这个条件下，图重复不出来

EDC/ sulfo-NHS 催化下脂质体连接抗体
2014-5-3.jpg
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1楼 2014-05-06 16:13:42
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s1523466

新虫 (小有名气)
请问楼主的脂质体 悬浮液用的是什么缓冲液，蛋白用的是什么缓冲液呢
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5楼2018-08-17 09:05:59
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john-yong

铁杆木虫 (小有名气)

RESEARCHER

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
likedong1021: 金币+1, 应助指数+1, 感谢回帖交流！ 2014-06-10 17:37:49
michaelzang: 金币+29, ★有帮助 2014-06-16 11:23:43
你的脂质体可以离心收集吗？如果可以的话，先离心收集，水洗几次，然后再去检测收集下来的脂质体上有没有抗体，或用跑胶，或用BCA测蛋白
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goodideas+abenchofextensivework+referenceaccumulation+abitoflucky=innovation
2楼2014-06-10 12:51:11
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michaelzang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by john-yong at 2014-06-10 12:51:11
你的脂质体可以离心收集吗？如果可以的话，先离心收集，水洗几次，然后再去检测收集下来的脂质体上有没有抗体，或用跑胶，或用BCA测蛋白

应该是能反映上的
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3楼2014-06-16 11:24:07
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namikangti

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by john-yong at 2014-06-10 12:51:11
你的脂质体可以离心收集吗？如果可以的话，先离心收集，水洗几次，然后再去检测收集下来的脂质体上有没有抗体，或用跑胶，或用BCA测蛋白

你好，我最近也在做脂质体与抗体的连接。用的是此方法，不知是否 连接成功，maker旁边的是对照蛋白其余是脂质体已不同的浓度与抗体进行连接。
EDC/ sulfo-NHS 催化下脂质体连接抗体-1


EDC/ sulfo-NHS 催化下脂质体连接抗体-2
60-70-90-80-80-.jpg
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4楼2015-04-10 23:33:31
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