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michaelzang木虫 (小有名气)
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EDC/ sulfo-NHS 催化下脂质体连接抗体 已有1人参与
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小虫，最近在做脂质体连接抗体的实验，实验效果一直不理想，想到小木虫牛人多，希望大家不吝指教。 制备了长循环脂质体，其中PEG端有羧基，利用羧基与抗体的-NH2 连接。 查阅文献说是在EDC与sulfo NHS催化下，反应良好。现把步骤列在下面，希望各位指出问题所： 1、 取脂质体悬液300 ul, 加入EDC 0.4mg 或 0.8 mg, sulfo NHS 1.1 mg 室温搅拌 15 min 后，将 1mg/ml 的 蛋白溶液 83 ul 加入上述溶液，搅拌过夜。 2、取上述反应液20 ul 加入 SDS PAGE 5*loading buffer 5 ul 煮沸 5 min ,上样，电泳后，考马斯亮蓝染色，脱色后观察条带位置。 这是问题就出来了，单纯的抗体与 理论上连接的抗体条带位置是一样的，我就不知道是连上了没测出来，还是根本就没连上。此外还有图片一张，可能是连上的 3. 但是这个条件下，图重复不出来  2014-5-3.jpg |
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