24小时热门版块排行榜    

查看: 663  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

[求助] E coli pTet 系统表达蛋白 已有1人参与

请问各位,在用pTet系统表达的时候,四环素的浓度都是多少?我用的是1ng/ml,诱导在30度过夜,但是对照质粒的RFP表达似乎比较弱,菌液颜色没有变化。

用arabinose诱导的时候,对照质粒RFP表达就可以看见菌液颜色明显变化。

两个对照质粒除了启动子意外,其他序列(RBS,酶切等)完全相同,而且对照质粒是从addgene买的。

我个人表达做的少,不明白什么道理,请各位赐教!不胜感激!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

我是说的不够清除,抱歉

实验是这样的,对照质粒,2个,一个是四环素诱导,一个是arabinose诱导,表达的都是RFP。

我要表达的蛋白,分别克隆在这俩启动子表达系统里。

诱导后,可以看到arabinose的对照菌液变得很红,而四环素诱导的对照没有颜色变化,我不知道是不是四环素诱导的浓度不够 (1ng/ul)还是其他原因?

有人建议用aTc诱导,代替四环素,不知道谁用过?

多谢
3楼2014-04-30 04:45:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

jinying1123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
meng_xu(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-29 20:54:44
你的意思是想说,两种表达系统差别不大,arabinose表达的好,而四环素系统表达不好,觉得不是四环素系统出现问题,而是诱导浓度选取不当,是这个意思么?那多加几个梯度浓度试试呢?

我有个疑问,四环素诱导系统addgene买的质粒那种都是带TetR和启动子就能构建这个系统了,抗性筛选不见得是四环素,可能是其他类型的抗生素,那这系统加四环素,菌为啥不死呢?
4楼2014-08-29 10:29:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后,还能找到好工作吗? +11 xqy2009 2026-10-13 13/650 2026-10-15 21:32 by bear2007
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗? 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
请填处理意见