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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » E coli pTet 系统表达蛋白
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

[求助] E coli pTet 系统表达蛋白 已有1人参与

请问各位，在用pTet系统表达的时候，四环素的浓度都是多少？我用的是1ng/ml，诱导在30度过夜，但是对照质粒的RFP表达似乎比较弱，菌液颜色没有变化。

用arabinose诱导的时候，对照质粒RFP表达就可以看见菌液颜色明显变化。

两个对照质粒除了启动子意外，其他序列（RBS，酶切等）完全相同，而且对照质粒是从addgene买的。

我个人表达做的少，不明白什么道理，请各位赐教！不胜感激！
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1楼 2014-04-29 07:58:53
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bolysu

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2014-04-29 09:01:04
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meng_xu

铜虫 (小有名气)
我是说的不够清除，抱歉

实验是这样的，对照质粒，2个，一个是四环素诱导，一个是arabinose诱导，表达的都是RFP。

我要表达的蛋白，分别克隆在这俩启动子表达系统里。

诱导后，可以看到arabinose的对照菌液变得很红，而四环素诱导的对照没有颜色变化，我不知道是不是四环素诱导的浓度不够 （1ng／ul）还是其他原因？

有人建议用aTc诱导，代替四环素，不知道谁用过？

多谢
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3楼2014-04-30 04:45:33
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jinying1123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
meng_xu(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-29 20:54:44
你的意思是想说，两种表达系统差别不大，arabinose表达的好，而四环素系统表达不好，觉得不是四环素系统出现问题，而是诱导浓度选取不当，是这个意思么？那多加几个梯度浓度试试呢？

我有个疑问，四环素诱导系统addgene买的质粒那种都是带TetR和启动子就能构建这个系统了，抗性筛选不见得是四环素，可能是其他类型的抗生素，那这系统加四环素，菌为啥不死呢？
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4楼2014-08-29 10:29:19
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