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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 保真性太差，200多的片段有6-7个bp的错配
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leiqin

新虫 (小有名气)

[求助] 保真性太差，200多的片段有6-7个bp的错配 已有8人参与

请问我该如何提高克隆的保真性？

扩增的目的片段均小于500bp，有的甚至只有200bp多一点，我用的康为的taqmix,结果测序回来后发现226bp的片段错配了6-7个，不同的单克隆，分别错配6个和7个。

不知道如何能够提高保真性。

如果我用taqmix与高保真酶混合，什么样的比例比较合适？另外用什么缓冲液呢？taqmix本身就是酶在缓冲液中，不知道能不能直接将两者混合起来，比例是多少呢？

谢谢各位！
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1楼 2014-04-27 14:10:33
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r-rainbow

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是以什么为模版的？cDNA还是质粒？另外突变的位点是密码子最后一位吗？还要确定你用做标准的序列正确，有些genbank上的序列就测了一次就发上去了。200bp就突变了那么多，不像是酶的问题。
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32楼2014-04-29 11:02:36
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kiss20085537
★
leiqin(金币+1): 谢谢参与
1

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-27 14:12:54
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火焱哥
★
leiqin(金币+1): 谢谢参与
7楼2014-04-27 14:30:52
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冷平武
★
leiqin(金币+1): 谢谢参与
8楼2014-04-27 14:32:44
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