应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » hepg2 细胞复苏
54/1返回列表
查看: 3927  |  回复: 34
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

[求助] hepg2 细胞复苏 已有8人参与

我一个月前冻存的细胞，复苏两次了，都以失败告终啊。复苏时细胞量挺多的，但过夜后贴壁的细胞极少，换液后就剩一点儿了。如下图：



继续培养几天就这样了：



知道怎么回事嘛？我的冻存步骤是：收集细胞，加入1ml冻存液（10%DMSO）。4度10min，20度30min，-80度过夜，然后保存在液氮中。
复苏步骤是：从液氮中取出一管细胞后立即放入37度水浴中解冻，快速解冻后，再加入新鲜培养基过夜培养，换液。


能看出我的问题在哪嘛？
回复此楼

» 猜你喜欢
我要我的自由！
1楼 2014-04-25 13:48:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yu756849034

木虫 (小有名气)
引用回帖:
33楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-05-03 12:36:32
也过节去了么？我好着急啊。...

不好意思，我们这几天在准备细胞周期还有电泳的试剂，比较忙！
赞一下 回复此楼
不作死不会死！！！
35楼2014-05-05 16:37:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 35 个回答

kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以试一试复苏的时候将冻存的细胞转入15ml离心管中，再向其中加入10ml培养基混匀，离心弃去上清，加入培养基重悬，最后加入培养皿中，过夜。
如果直接将冻存的细胞加入培养皿中的培养液，我们一般都是细胞贴壁（6h左右）后换液，因为DMSO长时间可能对一些细胞有损伤。
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-25 14:52:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你的细胞悬液的量是多少？ 你的细胞在4℃放置的时间有点少，不过你的复苏应该是没有问题的。我们实验室的细胞冻存步骤是每一盘细胞用2ml10%的细胞冻存液制细胞悬液，然后分装到两个细胞冻存管中，20℃30min，4℃1h，-20℃2h，-80℃过夜，在转移至液氮之中。每次都能够复苏成功，试了好多次是没有问题的。
不过现在我们实验室买了梯度冻存盒，细胞冻存管密封完之后直接放到梯度冻存盒中放入-80℃过夜，在转移至液氮之中就行了。
赞一下 回复此楼
不作死不会死！！！
3楼2014-04-25 16:14:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-25 14:52:20
可以试一试复苏的时候将冻存的细胞转入15ml离心管中，再向其中加入10ml培养基混匀，离心弃去上清，加入培养基重悬，最后加入培养皿中，过夜。
如果直接将冻存的细胞加入培养皿中的培养液，我们一般都是细胞贴壁（6 ...

我也有试过离心后再培养，一样不行的。
赞一下 回复此楼
我要我的自由！
4楼2014-04-25 16:57:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 35 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +7 Isak0320 2026-10-12 10/500 2026-10-12 22:38 by 大飞鱼鱼鱼
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 8/400 2026-10-12 18:09 by wangyl_123
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 6/300 2026-10-12 14:55 by 简单化xn
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭