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renaizhu8986新虫 (初入文坛)
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[求助]
请问怎样设计引物，完全听不懂老师讲的 已有2人参与
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| 怎样设计引物，请回答的详细点，谢谢 |
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4楼2014-04-24 21:40:53
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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引物设计有非常细的注意事项，从网上直接搜即可获得大量资料，建议楼主去搜集一些学习。 设计引物首先要保证引物与模板的序列要紧密互补，其次引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，还有就是引物不能在模板的非目的位点发生错配。 以下是一般原则： 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 2.引物长度一般在15~30碱基之间。 3.引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。 4.引物3′端要避开密码子的第3位。 5.引物3′端不能选择A，最好选择T。 6. 碱基要随机分布。 7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。 8. 引物5′ 端和中间△G值应该相对较高，而3′ 端△G值较低。 9.引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。 10. 扩增产物的单链不能形成二级结构。 11. 引物应具有特异性。 |
3楼2014-04-24 16:42:12
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