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renaizhu8986

新虫 (初入文坛)

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[求助] 请问怎样设计引物，完全听不懂老师讲的已有2人参与

怎样设计引物，请回答的详细点，谢谢

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年轻没有失败

1楼 2014-04-24 10:17:38

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hgdcongcong

木虫 (著名写手)

应助: 9 (幼儿园)
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专业: 炎症、感染与免疫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

引物设计有非常细的注意事项，从网上直接搜即可获得大量资料，建议楼主去搜集一些学习。
设计引物首先要保证引物与模板的序列要紧密互补，其次引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，还有就是引物不能在模板的非目的位点发生错配。
以下是一般原则：
1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。
2.引物长度一般在15~30碱基之间。
3.引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。
4.引物3′端要避开密码子的第3位。
5.引物3′端不能选择A，最好选择T。
6. 碱基要随机分布。
7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。
8. 引物5′ 端和中间△G值应该相对较高，而3′ 端△G值较低。
9.引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。
10. 扩增产物的单链不能形成二级结构。
11. 引物应具有特异性。