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renaizhu8986

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问怎样设计引物,完全听不懂老师讲的 已有2人参与

怎样设计引物,请回答的详细点,谢谢
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年轻没有失败
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伊天_1990

铜虫 (初入文坛)

我也要用到细菌的通用引物,但是我们老师说让公司设计。
啦啦啦
2楼2014-04-24 13:54:27
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hgdcongcong

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物设计有非常细的注意事项,从网上直接搜即可获得大量资料,建议楼主去搜集一些学习。
设计引物首先要保证引物与模板的序列要紧密互补,其次引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构,还有就是引物不能在模板的非目的位点发生错配。
以下是一般原则:
1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。
2.引物长度一般在15~30碱基之间。
3.引物GC含量在40%~60%之间,Tm值最好接近72℃。
4.引物3′端要避开密码子的第3位。
5.引物3′端不能选择A,最好选择T。
6. 碱基要随机分布。
7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。
8. 引物5′ 端和中间△G值应该相对较高,而3′ 端△G值较低。
9.引物的5′端可以修饰,而3′端不可修饰。
10. 扩增产物的单链不能形成二级结构。
11. 引物应具有特异性。
3楼2014-04-24 16:42:12
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
网上那么多资料~,虽然有很多设计原则,只要特异性足够(条带越长,引物也越长),上游下游TM值不要差太多,基本都能扩出来,引物设计好了,模板质量过关了,基本都没问题~
最简单~公司设计合成
4楼2014-04-24 21:40:53
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