24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 105.8
散金: 10
红花: 1
帖子: 103
在线: 37.2小时
虫号: 1663839
注册: 2012-03-04
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 3‘RACE序列比对了居然是26S核糖体RNA基因这是怎么回事求指点！！！！！万分感谢已有4人参与

应用CloneTech Smart RACE试剂盒做3’RACE 应用试剂盒的UPM引物基因特异性引物退火58度延伸2min

得到了750bp 和300bp 的条带测序结果都是26S核糖体RNA基因，不是我要的基因序列

请问我到底哪里出了错？

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有292人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

1楼2014-04-23 15:48:35

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

专家经验: +220
MolEPI: 20
应助: 231 (大学生)
金币: 10367.9
散金: 387
红花: 63
帖子: 540
在线: 151.9小时
虫号: 2811882
注册: 2013-11-19
专业: 生物化学
管辖: 分子生物

引用回帖:

15楼: Originally posted by yoyo单眼皮 at 2014-05-08 18:53:53
序列里面没有我的Linker！！！我真的不知道怎么回事感觉你好厉害啊！但是有我引物的序列，引物序列也不是完全匹配的。我也用我设计的一对特异性引物PCR 测序也是我要的基因，也就是说模板没问题，但是RACE 就 ...

那等于你的3’RACE全部失败
做RT的时候，有个oligod(T)-linker是吧？
一般情况下，为了避免非特异性，随后PCR的时候，是针对这个RT的linker再去设计一个3‘primer
如果你最终的克隆，只看到3’primer，连RT的linker都压根没有看见
说明是PCR时候的错配。
这跟你的检测引物能不能P出来关系不大，那只能说你的模板里面这个基因是表达的，但是不能保证你的模板里面这个基因的cDNA是完整的。
换上游引物，做巢式PCR。提高你PCR的特异性。