24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 105.8
散金: 10
红花: 1
帖子: 103
在线: 37.2小时
虫号: 1663839
注册: 2012-03-04
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 3‘RACE序列比对了居然是26S核糖体RNA基因这是怎么回事求指点！！！！！万分感谢已有4人参与

应用CloneTech Smart RACE试剂盒做3’RACE 应用试剂盒的UPM引物基因特异性引物退火58度延伸2min

得到了750bp 和300bp 的条带测序结果都是26S核糖体RNA基因，不是我要的基因序列

请问我到底哪里出了错？

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有147人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

1楼2014-04-23 15:48:35

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

niil

金虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 35 (小学生)
金币: 6673.5
红花: 3
帖子: 835
在线: 233.2小时
虫号: 876426
注册: 2009-10-18
性别: GG
专业: 生物信息学

这个RACE试剂盒最后反转录出来的cDNA基本是不含有RNA基因的的，而你的则扩增出来RNA，可能有些问题。
1.确定你的总RNA样品是否有DNA污染。
2.分析一下你的测序的750bp和300bp片段两端的引物是什么？是不是单引物扩增产生的？
3.你的基因特异性引物设计的是否符合要求，一般基因特异性引物Tm值高于70℃才好，长度超过25bp。
4.建议采用touchdown PCR、巢式PCR和热启动保真Taq酶。成功率会很高。