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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 转化后平板不长菌
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最末那抹夕阳

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化后平板不长菌 已有7人参与

用的pMD18-T载体，空载体长菌了，control insert也长了，但是长的不多，就是目的片段的连接产物一点都没长，是不是用的PCR反应的taq酶的问题，我用的是LA Taq酶
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1楼 2014-04-21 10:56:29
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windleakey

金虫 (小有名气)

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★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-23 23:49:54
好奢侈，我两千多bp都没用LA taq；
LA taq可以用于TA克隆；
这个实验按理来说不会有啥问题，浓度测不测都行不吧。
一般PCR产物都很浓，就连接体系：1ul pcr产物，1ul T载体，3ul 水，5ul solution1，连一个小时。
转50ul感受态细胞，总会长的。
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18楼2014-04-22 13:30:01
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wushm388

银虫 (小有名气)

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最末那抹夕阳(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-21 12:25:20
目的片段的加入量合适吗？也就是vector与外源片段之间的摩尔比如何？另外你的目的片段足够纯净吗？
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2楼2014-04-21 12:23:09
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kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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最末那抹夕阳(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-04-23 23:49:25
目的片段的长度是多少呢，我之前做的300多，七八百的很容易做，但一千做了好几次就是不成功呀。长度还是蛮影响结果的。
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3楼2014-04-21 12:39:01
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呀薯条

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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我之前做了好几遍，也一直没长。你的连接量是多少？回收的产物可以测下浓度看看
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4楼2014-04-21 15:22:11
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