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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 转化后平板不长菌
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最末那抹夕阳

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化后平板不长菌 已有7人参与

用的pMD18-T载体，空载体长菌了，control insert也长了，但是长的不多，就是目的片段的连接产物一点都没长，是不是用的PCR反应的taq酶的问题，我用的是LA Taq酶
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1楼 2014-04-21 10:56:29
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呀薯条

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
最末那抹夕阳: 金币+1 2014-04-22 09:46:40
引用回帖:
8楼: Originally posted by 最末那抹夕阳 at 2014-04-21 16:09:48
10微升体系，0.5ul载体，4.5ulPCR产物，5ul solution Ⅰ，回收的产物怎么测浓度啊...

我们实验室有个微量测定仪。也有同学是用少量产物回收再重新跑次PCR，然后根据与MARKER比对亮度，来大概推测下浓度，或者你也可以直接测分光光度计，测完260和280后，有个公式，可以得出其浓度。我前几次浓度就是太低了，第一次才六点几，后来有次是12点多，最后这次终于好点，是八十多
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14楼2014-04-22 08:55:03
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wushm388

银虫 (小有名气)

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★
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最末那抹夕阳(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-21 12:25:20
目的片段的加入量合适吗？也就是vector与外源片段之间的摩尔比如何？另外你的目的片段足够纯净吗？
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2楼2014-04-21 12:23:09
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kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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最末那抹夕阳(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-04-23 23:49:25
目的片段的长度是多少呢，我之前做的300多，七八百的很容易做，但一千做了好几次就是不成功呀。长度还是蛮影响结果的。
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3楼2014-04-21 12:39:01
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呀薯条

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我之前做了好几遍，也一直没长。你的连接量是多少？回收的产物可以测下浓度看看
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4楼2014-04-21 15:22:11
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