| 查看: 3463 | 回复: 37 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
guoqin_shiyin银虫 (正式写手)
|
[交流]
急!急!急!为什么克隆总是失败?(散100金币求助)
|
||
|
做分子克隆做了快一年了,可是除了有两次运气好连接上一个片段后,再也没有做出来过. 都快急死了!不明白到底是哪里出了问题,请高手指点啊. 一般质粒切3-4个小时,PCR产物片段一起切,然后电泳回收,按照浓度大概8:1--10:1的比例连接,质粒一般用量为50-100ng.转化,然后挑斑,可是总是失败,请问为什么呀? |
回复此楼» 猜你喜欢
梦想
已经有7人回复
-
学科评审组评审是指会评吗？
已经有4人回复
-
面上合作单位盖章
已经有8人回复
-
面上函评意见出来了，像什么等级？
已经有15人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有14人回复
-
小白求助 投论文要求的highlights应该如何写
已经有4人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有12人回复
-
怎么看青基中了没有啊
已经有6人回复
-
国社科又开始会评了，不知道这次命运如何
已经有11人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有19人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
| 曾经也有过类似的经历，不过后来改用连接T载体后再酶切就好了，我以前其中一个酶是NdeI，所以需要切过夜，因此你还要看看自己的酶切位点对不对，另外限制性内切酶所需要的酶切条件和时间怎样，是双酶一起切还是顺序单酶切，另外在网上有说提高连接效率的小技巧，具体内容在http://www.protocol-online.org/p ... ting-step-2601.html，希望对你有帮助 |
28楼2008-03-14 10:51:24
lauren180
木虫 (著名写手)
小木虫挖井人
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2319.2
- 帖子: 1735
- 在线: 67.5小时
- 虫号: 494550
- 注册: 2008-01-14
- 专业: 环境微生物学
2楼2008-03-05 19:01:01
傻子
木虫 (正式写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 2588.2
- 散金: 23
- 红花: 1
- 帖子: 622
- 在线: 213.1小时
- 虫号: 339910
- 注册: 2007-04-07
- 性别: GG
- 专业: 临床分子生物学检验
3楼2008-03-05 19:06:24
annwt
木虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 4670.9
- 散金: 119
- 红花: 5
- 帖子: 697
- 在线: 257.3小时
- 虫号: 400594
- 注册: 2007-06-12
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2008-03-05 19:06:54
30