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guoqin_shiyin银虫 (正式写手)
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[交流]
急!急!急!为什么克隆总是失败?(散100金币求助)
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做分子克隆做了快一年了,可是除了有两次运气好连接上一个片段后,再也没有做出来过. 都快急死了!不明白到底是哪里出了问题,请高手指点啊. 一般质粒切3-4个小时,PCR产物片段一起切,然后电泳回收,按照浓度大概8:1--10:1的比例连接,质粒一般用量为50-100ng.转化,然后挑斑,可是总是失败,请问为什么呀? |
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reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
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| 曾经也有过类似的经历，不过后来改用连接T载体后再酶切就好了，我以前其中一个酶是NdeI，所以需要切过夜，因此你还要看看自己的酶切位点对不对，另外限制性内切酶所需要的酶切条件和时间怎样，是双酶一起切还是顺序单酶切，另外在网上有说提高连接效率的小技巧，具体内容在http://www.protocol-online.org/p ... ting-step-2601.html，希望对你有帮助 |
28楼2008-03-14 10:51:24