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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

[交流] 急!急!急!为什么克隆总是失败?(散100金币求助)

做分子克隆做了快一年了,可是除了有两次运气好连接上一个片段后,再也没有做出来过.

都快急死了!不明白到底是哪里出了问题,请高手指点啊.

一般质粒切3-4个小时,PCR产物片段一起切,然后电泳回收,按照浓度大概8:1--10:1的比例连接,质粒一般用量为50-100ng.转化,然后挑斑,可是总是失败,请问为什么呀?
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傻子

木虫 (正式写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):THX
可以考虑把有酶切位点片段的PCR产物先连上T载体再切,这样比较稳定
1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能,国家免检优质产品。
3楼2008-03-05 19:06:24
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傻子

木虫 (正式写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):THX
T载体是高效的简易连接的载体,可以平端连接,PCR产物只要加了ploy A尾巴的就可以连接,不需要酶切等步骤
1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能,国家免检优质产品。
6楼2008-03-05 19:18:18
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