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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落PCR有杂带
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR有杂带 已有5人参与

各位大虾，下面是我菌落PCR电泳检测的结果，主带是我的目的条带，但是这次PCR结果基本都有较明显的杂带，是我PCR操作的问题，还是其他什么原因呢？还有就是这样的菌液送测序，结果不好吗？

菌落PCR有杂带
2014.4.15-18s.png
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越努力越幸运
1楼 2014-04-15 17:57:44
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音四1990

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by PCR-CL at 2014-04-16 21:19:39
从菌液中扩增得到的结果，已经不错了！有点儿非特异扩增是正常的！

若想改善，方案：
1、提高退火温度。
2、换高退火、特异性高的引物。
3、。。。。。。

如果你的目的只是为了测序，那就不需要研讨条件， ...

有杂带的菌液也可以送去测序吗？会不会出双峰什么的
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我没那种命啊轮也不会轮到我
16楼2014-04-25 11:36:59
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是退火温度低了？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-04-15 18:21:56
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-04-15 20:50:34
非特异性片段，有时提高退火温度会有作用。。。
还有，可能污染杂菌。。。
另外，需要正对照，这样可以比较。。。
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3楼2014-04-15 18:35:15
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David勇

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-04-15 20:50:40
用的引物是通用引物吗？是不是挑克隆的时候无然杂菌，或者不是单克隆，有很多原因的，退火温度也可以高点试下。以前有没有做出过没有杂带的情况？
赞一下 回复此楼
4楼2014-04-15 19:56:52
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