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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 腹水，辛酸-硫酸铵纯化
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蓝默儿

金虫 (小有名气)

[求助] 腹水，辛酸-硫酸铵纯化 已有2人参与

腹水亚型是IgG1，纯化之前测其浓度为20毫克/毫升，纯化测其浓度为800微克/毫升，重复做了两次

具体步骤为：
1、 离心。12000rpm，5min，取上清于小烧杯中。
2、上清用0.45nm滤膜过滤。
3、加4倍体积PH4.5的醋酸缓冲液，边加边搅拌。
4、混合后，按每毫升稀释腹水加33ul的正辛酸，边加边搅拌。
5、室温搅拌30min，，取出12000rpm，离心30分钟，弃沉淀。
6、上清用0.45nm滤膜过滤，滤液调PH=7.4.
7、加入饱和硫酸铵至45%饱和度，搅拌30分，4°过夜或5小时以上。
8、4° ，12000rpm，离心30分钟弃上清保留沉淀，
9、10mMTris （PH=9.0）重悬沉淀，用透析卡进行透析过夜4°，
10、4°，12000rpm，5min取上清，定容，测下浓度。

别的实验室按次方法做没问题，就是第6步，我用滤膜过滤，他用滤纸过滤。不知为什么我的浓度好低，求高手指点
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微笑，自信，加油
1楼 2014-04-14 10:10:41
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蓝默儿

金虫 (小有名气)
我觉得第6步的滤纸或滤膜过滤都是没问题的，只是为了除杂，只觉得滤膜过滤效果更好了。
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微笑，自信，加油
2楼2014-04-14 10:12:52
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wys476488620

金虫 (正式写手)
用滤纸的是不是你做的 ？   其它步骤 你确定 他和你的做法一样 你亲眼看了没
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踏踏实实的就行了
3楼2014-04-14 12:37:56
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蓝默儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wys476488620 at 2014-04-14 12:37:56
用滤纸的是不是你做的 ？   其它步骤 你确定 他和你的做法一样 你亲眼看了没

他用的滤膜，我用的滤纸，基本细节都告诉了，我自己也上网查找，才做的实验。你觉的哪出现问题了，谢谢
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微笑，自信，加油
4楼2014-04-14 13:21:58
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wys476488620

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 蓝默儿 at 2014-04-14 13:21:58
他用的滤膜，我用的滤纸，基本细节都告诉了，我自己也上网查找，才做的实验。你觉的哪出现问题了，谢谢...

我晕了  你上面说他用滤纸 你用滤膜 这回有反说了 说清楚点
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踏踏实实的就行了
5楼2014-04-14 13:42:27
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elise1987

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
蓝默儿: 金币+1 2014-06-10 14:24:49
用这个滤膜没问题的。IgG 150KD差不多了，0.45的滤膜没问题，你查查其它方面的原因。
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不折腾，不胡闹，珍惜时间和生命
6楼2014-04-14 13:56:14
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wys476488620

金虫 (正式写手)
我还没开始做呢 只是看过腹水单抗纯化方法的文献资料   共同探讨吧    如果是别人用这个方法做出来浓度高 那就是你操作问题
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踏踏实实的就行了
7楼2014-04-14 14:06:26
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蓝默儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wys476488620 at 2014-04-14 13:42:27
我晕了  你上面说他用滤纸 你用滤膜 这回有反说了 说清楚点...

哦，抱歉，打错，但这都不影响的。
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微笑，自信，加油
8楼2014-04-14 14:29:56
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wys476488620

金虫 (正式写手)
问题解决了没？
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踏踏实实的就行了
9楼2014-04-16 16:40:31
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蓝默儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wys476488620 at 2014-04-16 16:40:31
问题解决了没？

改用过柱子，纯出来了。
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微笑，自信，加油
10楼2014-04-16 18:46:14
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