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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 腹水，辛酸-硫酸铵纯化
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wys476488620

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 蓝默儿 at 2014-04-16 18:46:14
改用过柱子，纯出来了。...

哦    那你直接腹水过柱子 还是先用辛酸硫酸铵处理下再过
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踏踏实实的就行了
11楼2014-04-16 21:57:09
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159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神

【答案】应助回帖

问题在于：
1. 你的饱和硫酸铵调PH了吗
2. 第六步上清用0.45nm滤膜过滤，没问题;问题在于滤液调PH=7.4 PH有点低
3. 第七步 饱和硫酸铵45%不一定合适
4. 第十部 沉淀多吗？如果多，目的抗体含量一定少
给你的小建议，从这几面分析，不对地方，还望指正，谢谢
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云山苍苍，江水泱泱，先生之风，山高水长
12楼2014-04-18 10:30:30
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自来也哈哈

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 蓝默儿 at 2014-04-16 18:46:14
改用过柱子，纯出来了。...

楼主你好，我最近也在纯腹水，想问一下你过柱子的流程，是不是过的protein G柱，然后甘氨酸洗脱，收集管中事先加入100ul的Tris ，然后进行透析或者超滤。效果怎么样你最后蛋白浓度怎么样？
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13楼2015-01-27 13:47:26
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幸运星图

新虫 (初入文坛)
您好，您这边先用正辛酸然后用饱和硫酸铵，我的方法与之一致，只是方法步骤相反，先用饱和硫酸铵后用正辛酸，透析前后检测两者浓度相差10倍，检测基本上上没有蛋白含量，用两步法进行纯化蛋白有双重除杂功能，蛋白含量会明显降低，故而自身纯化是自身的蛋白含量必须高才可行，但是在透析前检测了蛋白含量子在1mg/ml左右，透析后检测蛋白浓度只有0.1mg/ml,透析液为PBS，重复两次依然是此现象。
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14楼2017-05-09 11:14:37
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