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蓝默儿金虫 (小有名气)
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[求助]
腹水，辛酸-硫酸铵纯化 已有2人参与
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腹水亚型是IgG1，纯化之前测其浓度为20毫克/毫升，纯化测其浓度为800微克/毫升，重复做了两次 具体步骤为： 1、 离心。12000rpm，5min，取上清于小烧杯中。 2、上清用0.45nm滤膜过滤。 3、加4倍体积PH4.5的醋酸缓冲液，边加边搅拌。 4、混合后，按每毫升稀释腹水加33ul的正辛酸，边加边搅拌。 5、室温搅拌30min，，取出12000rpm，离心30分钟，弃沉淀。 6、上清用0.45nm滤膜过滤，滤液调PH=7.4. 7、加入饱和硫酸铵至45%饱和度，搅拌30分，4°过夜或5小时以上。 8、4° ，12000rpm，离心30分钟弃上清保留沉淀， 9、10mMTris （PH=9.0）重悬沉淀，用透析卡进行透析过夜4°， 10、4°，12000rpm，5min取上清，定容，测下浓度。 别的实验室按次方法做没问题，就是第6步，我用滤膜过滤，他用滤纸过滤。不知为什么我的浓度好低  ，求高手指点 |
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4楼2014-04-14 13:21:58
