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LiJie861027

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[求助] 双萤光素酶报告实验应用和实时荧光定量的区别已有1人参与

如题，在实际应用中，双萤光素酶报告实验和实时荧光定量有区别么？
例如，通过双萤光素酶报告实验证明了A基因过表达对由LPS引起的IFN-I启动子的活化有增强作用（与WT相比，A过表达后，IFN-I启动子的荧光活性显著增强），其最终是为了说明A基因过能增强IFN-I的表达么？如果是这样，我在A过表达，LPS刺激的条件下，用实时荧光定量来检测IFN-I的表达量，同样可以得出这样的结论呀？
PS:我对于双萤光素酶报告实验的应用及其意义不是很清楚，请大神指点！！！

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1楼 2014-04-11 22:51:06

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biostar2009

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【答案】应助回帖

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LiJie861027(myprayer代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-12 17:34:45
LiJie861027: 金币+10, ★★★很有帮助, 非常感谢你的指点，虽然不能完全理解，但对我还是帮助很大 2014-04-22 14:53:54

善于思考！
有什么不同呢？
就比如你的研究对象，是某个启动子，研究某种条件下对该启动子的作用，为什么不直接检测其内源驱动的基因的表达情况，而非要做一个报告基因系统？
其中最主要的一个因素，就是内源基因表达调控，大多数情况下都是多层次的。该启动子可以控制其下游基因的表达，但是这只是这个基因最终表达的一个调控点。不管你是检测RNA水平还是蛋白水平，都还有太多可能对其有影响。这样就把事情搞复杂了。回答不了是直接还是间接的问题。
而你注意观察报告基因。都是选的什么基因？都是来自遥远的物种。跟常规研究对象一点关系没有，一般认为，启动之后表达就没有什么其他调控了。所以虽然这里不是内源情况，但是更能说明问题。
这是我认为的最重要的一个方面。
其实每个系统都不是完美的，生物实验需要佐证，仔细想想，这些系统都不完密。

[ 发自小木虫客户端 ]

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