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lyz65956木虫 (正式写手)
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[交流]
求助关于质粒
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有一批别人赠送的克隆质粒， 各种原因， 无法知道其详细信息。 知道有我的目的基因大概七八千， 但是由于是环状DNA想通过测序找到其线性化位点 试过许多的通用引物 比如 M13 T7等 测序了大部分。 其中有小部分无法测序成功，或者测到的序列为载体序列，将测到的序列比对发现为载体序列 但是有很多的载体， 请问有什么办法可以测序，判断出到底什么载体 或者更好的办法知道 目的基因的线性位点 |
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我大概懂你的情况了，就是说你要的基因，自然情况也是个圈，现在套在更大的一个质粒圈里面了？ 然后还有七八千。。。 一个省事的办法，就是继续测，总能测到载体上的，这样你一旦知道一个头，肯定另一个也知道了。 另一个复杂一点也不见得搞得出来的办法，找到你基因上的酶切位点， 两两组合去切 虽然载体上可能也有这个位点会掉下来片段，但是应该不影响 关注你两两组合的产物大小存不存在 比如HindIII BamHI XhoI XbaI 比如HindIII和BamHI中间应该是2K，如果掉下来是2K，那说明这中间是连着的 如果掉下来不是2K，变得很大，那说明线性化装入载体这个大圈的位置应该就在这两个位点中间。 呵呵，这个等于在做物理图谱了 虽然麻烦一点，但是可能会比测序更快，你一次可以切很多组合。 |
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lyz659567楼2014-04-11 14:41:10