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polly2879

新虫 (初入文坛)

[求助] MAPK通路 已有1人参与

最近再做MAPK的western，看来血清的影响很大。
我用5%FBS 的DMEM养的J774细胞，待细胞铺好板之后换成无血清的DMEM处理12h~14h，再用LPS处理，并设置不处理的阴性对照。
但实验结果总是，LPS实验组的p-ERK1/2有条带，正常；没处理的阴性对照也有条带，这是为什么啊？
是否饥饿处理得不对？
求大神指教怎样能做出ERK1/2不被激活的阴性对照？
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1楼 2014-04-08 14:51:24
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huiting410

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-04-09 18:33:48
可能本身细胞就有这个通路的开启啊，但是LPS处理后p-JNK表达量应该上调很多
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2楼2014-04-09 16:04:42
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polly2879

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huiting410 at 2014-04-09 16:04:42
可能本身细胞就有这个通路的开启啊，但是LPS处理后p-JNK表达量应该上调很多

LPS处理的话，有效时间是多久啊？我用细菌侵染8个小时后，LPS也是处理8个小时，但是LPS处理组那时候效果就不明显了
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3楼2014-04-14 15:53:48
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huiting410

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by polly2879 at 2014-04-14 15:53:48
LPS处理的话，有效时间是多久啊？我用细菌侵染8个小时后，LPS也是处理8个小时，但是LPS处理组那时候效果就不明显了...

得看你是什么细胞了，你可以做一个时间梯度的，有的细胞表达时间特别早，几十分钟可能就达到高峰了
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4楼2014-04-14 20:16:11
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polly2879

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huiting410 at 2014-04-14 20:16:11
得看你是什么细胞了，你可以做一个时间梯度的，有的细胞表达时间特别早，几十分钟可能就达到高峰了...

恩，好的，谢谢
亲你做这方面的实验么
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5楼2014-04-16 10:56:26
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huiting410

金虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by polly2879 at 2014-04-16 10:56:26
恩，好的，谢谢
亲你做这方面的实验么...

曾做过
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6楼2014-04-16 11:38:41
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polly2879

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by huiting410 at 2014-04-16 11:38:41
曾做过...

那是用什么细胞啊？我现在是用细菌刺激细胞观察细胞信号通路的变化，你当时做的时候是细菌还是药物还是蛋白刺激呢？刺激什么细胞啊
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7楼2014-04-21 13:53:54
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huiting410

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by polly2879 at 2014-04-21 13:53:54
那是用什么细胞啊？我现在是用细菌刺激细胞观察细胞信号通路的变化，你当时做的时候是细菌还是药物还是蛋白刺激呢？刺激什么细胞啊...

药物刺激 细胞有很多种类了，内皮细胞 免疫细胞 结肠癌细胞
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8楼2014-04-21 17:44:51
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纸鸢之梦

至尊木虫 (著名写手)
你好，我也需要J774细胞，请问你能否赠与一些呢
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9楼2014-05-09 18:41:16
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