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zrz_23

新虫 (初入文坛)

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专业: 动物遗传学

[求助] 免疫共沉淀诱饵蛋白不表达已有1人参与

之前用酵母双杂交进行筛选是正常表达的，接着用免疫共沉淀验证的时候诱饵蛋白居然没有表达，而且目的蛋白也有两个没表达，用的是最常用的293细胞，求助各位高人帮忙分析下原因。

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1楼 2014-04-02 10:47:08

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d00614028

银虫 (小有名气)

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性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 谢谢参与 2014-04-02 15:22:05

酵母双杂相当于是在体外研究蛋白之间的相互作用，你是把基因连接到双杂的载体中，用高表达量的启动子来启动prey 和Bait的表达，用的并不是蛋白本身的启动子；而免疫共沉淀相当于在体内研究蛋白之间的相互作用，这个用的是自身的启动子。所以你双杂能检测到相互作用，免疫共沉淀酶检测到表达也正常的额，你最好先用相应的抗体检测下相关蛋白的表达，提高上样量，带上Actin的对照，看你这几个蛋白在细胞中的表达怎么样，然后再尝试IP哦。

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