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免疫共沉淀诱饵蛋白不表达 已有1人参与
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| 之前用酵母双杂交进行筛选是正常表达的，接着用免疫共沉淀验证的时候诱饵蛋白居然没有表达，而且目的蛋白也有两个没表达，用的是最常用的293细胞，求助各位高人帮忙分析下原因。 |
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d00614028
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 谢谢参与 2014-04-02 15:22:05
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silicare: 金币+5, BioEPI+1, 谢谢参与 2014-04-02 15:22:05
| 酵母双杂相当于是在体外研究蛋白之间的相互作用，你是把基因连接到双杂的载体中，用高表达量的启动子来启动prey 和Bait的表达，用的并不是蛋白本身的启动子；而免疫共沉淀相当于在体内研究蛋白之间的相互作用，这个用的是自身的启动子。所以你双杂能检测到相互作用，免疫共沉淀酶检测到表达也正常的额，你最好先用相应的抗体检测下相关蛋白的表达，提高上样量，带上Actin的对照，看你这几个蛋白在细胞中的表达怎么样，然后再尝试IP哦。 |
2楼2014-04-02 13:27:13