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WB扫膜出现背景深且有些条带呈白亮状是怎么回事？ 已有3人参与
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| 之前做的一直很好。最近老是出现背景很深而有杂带的情况，膜上还有些条带白的发亮，也不知道是不是目标条带（杂带太多）。且换了抗体后还是会出现这样的问题，而实验室有其他老师做出来也是这样的情况（做的抗体和蛋白都不同）。大家认为可能是什么原因造成的呢？ |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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凌波丽
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【答案】应助回帖
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WB出现非特异性条带的原因与解决方法： 1.抗体浓度过高；降低一抗、二抗的浓度。 2.一抗的特异性不足；使用单克隆抗体。 3.二抗的非特异性结合，不加一抗，其他操作不变，即可检测出二抗的非特异性的条带是否来自二抗的非特异性结合；此时需要重新选择二抗。 4.样品蛋白质上样量过大；降低上样量。 5.样品蛋白质发生了降解，降解产物成为了一抗或二抗的新的抗原，尤其是在一抗或二抗不是单克隆抗体时更为明显；避免对样品蛋白质反复冻融，食用新鲜的蛋白质样品，可以使用蛋白酶的广谱抑制剂（已经有商用产品），必要的话使用分子筛层析或HPLC纯化蛋白质样品后再上样（HPLC不能用于蛋白质制备，不过用做WB的量还是能够提供的）。 6.细胞传代过多，导致蛋白质变异。使用传代次数少的细胞的表达的蛋白质进行对比，并且作为分子筛层析或HPLC的纯化标准。 |
8楼2014-07-18 10:31:36
2楼2014-03-28 21:48:29
d00614028
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3楼2014-03-28 22:41:28
4楼2014-03-29 09:58:57
