| 查看: 10341 | 回复: 8 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[求助]
WB扫膜出现背景深且有些条带呈白亮状是怎么回事？ 已有3人参与
|
|||||
| 之前做的一直很好。最近老是出现背景很深而有杂带的情况，膜上还有些条带白的发亮，也不知道是不是目标条带（杂带太多）。且换了抗体后还是会出现这样的问题，而实验室有其他老师做出来也是这样的情况（做的抗体和蛋白都不同）。大家认为可能是什么原因造成的呢？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
建议基金发布提前给出明确的时间点
已经有13人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有7人回复
-
今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果
已经有20人回复
-
科研孤儿太难了
已经有18人回复
-
看来今天不会放榜了？
已经有11人回复
-
时间戳又变了
已经有19人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有14人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有13人回复
-
人气不行了
已经有7人回复
-
感觉是下周放榜了
已经有12人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- WB 封闭液 tween 浓度
已经有21人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - BioEPI: 11
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
|
WB出现非特异性条带的原因与解决方法： 1.抗体浓度过高；降低一抗、二抗的浓度。 2.一抗的特异性不足；使用单克隆抗体。 3.二抗的非特异性结合，不加一抗，其他操作不变，即可检测出二抗的非特异性的条带是否来自二抗的非特异性结合；此时需要重新选择二抗。 4.样品蛋白质上样量过大；降低上样量。 5.样品蛋白质发生了降解，降解产物成为了一抗或二抗的新的抗原，尤其是在一抗或二抗不是单克隆抗体时更为明显；避免对样品蛋白质反复冻融，食用新鲜的蛋白质样品，可以使用蛋白酶的广谱抑制剂（已经有商用产品），必要的话使用分子筛层析或HPLC纯化蛋白质样品后再上样（HPLC不能用于蛋白质制备，不过用做WB的量还是能够提供的）。 6.细胞传代过多，导致蛋白质变异。使用传代次数少的细胞的表达的蛋白质进行对比，并且作为分子筛层析或HPLC的纯化标准。 |
8楼2014-07-18 10:31:36
2楼2014-03-28 21:48:29
d00614028
银虫 (小有名气)
- BioEPI: 4
- 应助: 76 (初中生)
- 金币: 1148.6
- 红花: 4
- 帖子: 150
- 在线: 123.1小时
- 虫号: 650785
- 注册: 2008-11-10
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2014-03-28 22:41:28
4楼2014-03-29 09:58:57
40