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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 质粒图谱询问
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DandelionLS

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒图谱询问 已有1人参与

我初进实验室，看不懂质粒图谱啊，
T7启动子怎么和lacZ的方向相反啊，我要插入基因，怎样插入才可以表达呢？

质粒图谱询问
质粒图谱
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1楼 2014-03-25 11:00:36
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
这个是是全式金的克隆载体吧？
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jiayoubashaonian
2楼2014-03-25 14:02:28
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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DandelionLS: 金币+5, ★有帮助 2014-03-25 17:07:26
这是一个克隆载体，更具体的说是一个T-A克隆载体，不是表达载体，驱动LacZ表达的启动子不是T7启动子，其上游及图谱左边有其自己的启动子，一般是Plac，如果你需要表达你的基因的话，你应该选择表达载体比如带His taq的系列载体pET，带GST tag的pGEX系列载体
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3楼2014-03-25 16:08:09
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DandelionLS

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2014-03-25 14:02:28
这个是是全式金的克隆载体吧？

恩，是的
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4楼2014-03-25 17:04:22
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DandelionLS

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2014-03-25 16:08:09
这是一个克隆载体，更具体的说是一个T-A克隆载体，不是表达载体，驱动LacZ表达的启动子不是T7启动子，其上游及图谱左边有其自己的启动子，一般是Plac，如果你需要表达你的基因的话，你应该选择表达载体比如带His ta ...

既然lacZ可以表达，是不是我插入的基因也可以微量表达呢？
既然是克隆载体，那它的T7启动子是干什么用的呢？
它的方向是不是与LacZ相反呢？
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5楼2014-03-25 17:07:01
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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引用回帖:
5楼: Originally posted by DandelionLS at 2014-03-25 17:07:01
既然lacZ可以表达，是不是我插入的基因也可以微量表达呢？
既然是克隆载体，那它的T7启动子是干什么用的呢？
它的方向是不是与LacZ相反呢？...

你首先对相关的原理还没有搞清楚，什么时候用克隆载体，什么时候用表达载体

既然lacZ可以表达，是不是我插入的基因也可以微量表达呢？
1. 如果你选择T-A克隆方法插入载体，你需要先筛选下你基因的方向；
2. 即使方向是对的，你的基因还要看是否能和Lac Z基因的N端融合，如果能融合，你的基因当然能够进行表达

既然是克隆载体，那它的T7启动子是干什么用的呢？
T7启动子在这里跟你基因体内表达没有任何关系，这个载体有或者没有T7效果都是一样，加T7的启动子的一个好处是可以在T7 polymerase的作用下进行体外转录

它的方向是不是与LacZ相反呢？
如果你将基因克隆在T7启动子的下游，在DH5a是可以表达，但DH5a不是表达蛋白的合适菌株，如果你克隆进BL21，由于没有LacI的表达，所以不能进行诱导
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2014-03-25 17:55:58
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