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susandan

新虫 (小有名气)

[求助] 抗原抗体合成透析袋的选择 已有2人参与

我现在在做半抗原与载体蛋白连接,用透析袋的话一般用什么规格的?半抗原分子量小于500,连接BSA、OVA。后期做抗体纯化的时候怎么选择透析袋呢?前辈们都在哪买透析袋呢?实验室没有人做过这个,有点迷茫……
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susandan

新虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by xiaxzhp at 2014-03-25 11:12:24
透析袋用截留分子量8000~14000的就可以,如果考虑到后期需要用PEG-20000浓缩的话,最好选择截留分子量3500的,这样保险一点。透析袋在网上应该有很多人卖,你可以自己搜一下。

在淘宝上买应该可以吧?是不是在能保证我不需要的小分子透出的情况下截留量越小越好呢?
3楼2014-03-26 11:03:51
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susandan

新虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by 千寻@德院 at 2014-09-02 15:49:36
你好,想问一下你用什么溶液做的透析,我用的蒸馏水,有沉淀

用的PBS
7楼2014-09-02 17:35:01
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susandan

新虫 (小有名气)

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8楼: Originally posted by 千寻@德院 at 2014-09-05 14:54:56
你好,我想问一下你们抗原合成后使用什么方法检测半抗原与载体蛋白是否连上的呢,谢谢?...

紫外,MAIDI
9楼2014-09-05 16:19:38
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susandan

新虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by 千寻@德院 at 2014-09-09 10:58:28
问一下半抗原和BSA稀释成0.5g/L和1g/L,偶联后的1:4稀释可以吗,我初次做实验,细节的地方不懂,还请多指教,谢谢...

没有看太明白你的意思,我是按半抗原和BSA 20:1偶联的,偶联后稀释到大概2mg/mL保存,乳化免疫
11楼2014-09-10 09:03:31
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susandan

新虫 (小有名气)

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12楼: Originally posted by 千寻@德院 at 2014-09-10 10:29:03
你们用紫外分光也应该是扫全波长来判断是否连上吧,我想问一次具体该怎么稀释。谢谢!...

我们用的NANODROP,可以给出大概的浓度,不过你自己连的时候用了多少蛋白,透析纯化后析出了多少提及,大概算一下就可以了。我得到的这两种结果基本是一致的
13楼2014-09-11 10:22:16
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susandan

新虫 (小有名气)

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14楼: Originally posted by 千寻@德院 at 2014-09-16 09:48:08
你的意思是说透析后,半抗原和BSA高都被透出来了?...

只有未能连接上的半抗原透析出来了啊
15楼2014-09-20 09:01:33
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