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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 再花3个金币求教各位高手：cy5、cy3标记原理是什么？
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sunic

木虫 (著名写手)

道法自然

[交流] 再花3个金币求教各位高手：cy5、cy3标记原理是什么？

cy5、cy3标记的原理是什么？

cy5、cy3怎样标记蛋白质？

哪位高手知道用cy5或cy3标记蛋白质的实验方法呀？
本人希望用于生物芯片！

补充：我做的是一种新型生物芯片，专门检测特异性蛋白质，但是蛋白质需要染色或标记才能进行检测，国外很多文献都是直接购买已经接好发光基团的蛋白质，而我涉及的蛋白质都比较偏门，需要自己染色。cy5、cy3是最常用，具有相对普遍性，也是仪器设计和易于识别的，但是染色好象不是那么简单，一般的报道这些过程都省略了，而实际中必须用好！

清楚应助者请斑竹帮我送他3个金币（一个问题一个，呵呵）
sunzic@mails.gucas.ac.cn
请勿回答无关话题，谢谢！

未得到有用答案，继续求助！！！
谢谢上面各位虫友的热心帮助，还是要继续求助啊！！！

[ Last edited by sunic on 2008-2-22 at 16:23 ]
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不怕太阳晒，也不怕风雨狂，就怕先生骂我懒啊，回家无颜见爹娘
1楼 2008-02-20 16:48:22
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bsksln

银虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,代搂住答谢
你好，我已经把荧光差异双向电泳（DIGE）的一个相关视频，和Ettan DIGE用户手册发到了您的邮箱里，1楼的朋友说的对，我给您的资料里有详细的实验方法。
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分子细胞
3楼2008-02-21 03:10:44
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普通回帖

soniabee

铜虫 (初入文坛)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):谢谢分享,代搂住答谢
晕了
不知道楼主问的是不是DIGE
cy3和cy5是带有不同荧光集团的
不是标记蛋白质，是染色
关于实验方法
不知道你是要具体流程呢还是。。。。
简单的说就是
先用不同的染料与样本混合，比如cy3和样本A混合，cy5和样本b混合
然后将样本A＆b混合。
跑2DE
进行扫描，进行分析

不知道lz问这个的目的是什么
如果说的具体点能回答的更有针对性
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2楼2008-02-20 21:08:48
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sunic

木虫 (著名写手)

道法自然
谢谢！
不过过程我也知道一些，但不知道原理啊？
Cy3和Cy5的结构是什么啊？怎么反应的？
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不怕太阳晒，也不怕风雨狂，就怕先生骂我懒啊，回家无颜见爹娘
4楼2008-02-21 08:39:04
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bsksln

银虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
引用回帖:
Originally posted by sunic at 2008-2-21 08:39:
谢谢！
不过过程我也知道一些，但不知道原理啊？
Cy3和Cy5的结构是什么啊？怎么反应的？

据我所知，Ettan DIGE是通用电气开发的一整套系统，各种试剂盒，试验方法，软件，都配备完整，所用的染料Cy3，Cy5很可能是有专利权的。而且搞生命科学的已经对化学物质（生命分子除外）的结构不很感冒了，楼主搞化学吧，化学比较注重结构和机理。
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分子细胞
5楼2008-02-21 11:11:33
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sunic

木虫 (著名写手)

道法自然
reasonspare(金币+0,VIP+0):xiexie 关注,虫友已经应助,请及时交流
是啊，不知道怎么结合的，我就没把握操作好
可是网络上找不到具体答案
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不怕太阳晒，也不怕风雨狂，就怕先生骂我懒啊，回家无颜见爹娘
6楼2008-02-21 15:11:06
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bsksln

银虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
引用回帖:
Originally posted by sunic at 2008-2-21 15:11:
是啊，不知道怎么结合的，我就没把握操作好
可是网络上找不到具体答案

一般分子生物学里的实验都是这样，按照manual操作，或者自己实验室有了一套自己常用的方法，按照做就可以。
而且有些有专利保护的产品，它们的基本原理了解，但具体机理也不是很容易能搞到的。
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分子细胞
7楼2008-02-21 22:53:28
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sunic

木虫 (著名写手)

道法自然
未得到有用答案，继续求助！！！
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不怕太阳晒，也不怕风雨狂，就怕先生骂我懒啊，回家无颜见爹娘
8楼2008-02-22 08:45:20
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bsksln

银虫 (小有名气)
我又查到了一些相关资料，可能接近师兄的最终答案了，但还是没有完全解决，努力ing

1.http://www.iupac.org/goldbook/C01487.pdf
这个文件里是Cy（cyanine dyes）的general formula，但是Cy2，Cy3，Cy5的具体信息还有待寻找。
其他很多文献里的Cy都是有区别的，R2N+=CH[CH=CH]nNR2是通式。

2.下面两段话，是在通用电气找来的
Minimal labeling dyes
Size and charge matched
3 colors: Cy2, Cy3, Cy5
label ε-amino group of lysine
reactive group：NHS ester

Saturation labeling dyes
Size matched, neutral charge
2 colors: Cy3, Cy5
label thiol group of cysteine
reactive group：Maleimide


我理解的意思是，Ettan DIGE里有两种不同的染料。
一种是叫做“最小标记法染料”，有Cy2，Cy3，Cy5三种，它们的大小匹配，电荷匹配（都带一价正电荷，原因见后）。它们标记ε-NH2，因为ε-NH2带一正电荷，所以被染色后，ε-NH2被标记，没有电荷，而染料带一正电荷，总的来说蛋白的等电点是不变的。reactive group是NHS easter（NHS，丁二酰亚胺）
另一种叫“饱和标记法染料”，有Cy3，Cy5两种，大小匹配，电中性，标记半胱氨酸的巯基。reactive group是maleimide（顺丁烯二酰亚胺）
具体的机理我不明白，师兄根据所提到的基团是不是能推测出来？

[ Last edited by bsksln on 2008-2-22 at 14:42 ]
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分子细胞
9楼2008-02-22 11:15:36
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soniabee

铜虫 (初入文坛)
不知道lz的具体用意是什么
肯定不是想用DIGE进行研究

至于原理，建议lz直接写信给GE问
否则在网上也问不出什么来
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10楼2008-02-22 13:24:30
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