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sunic木虫 (著名写手)
道法自然
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[交流]
再花3个金币求教各位高手：cy5、cy3标记原理是什么？
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cy5、cy3标记的原理是什么？ cy5、cy3怎样标记蛋白质？ 哪位高手知道用cy5或cy3标记蛋白质的实验方法呀？ 本人希望用于生物芯片！ 补充：我做的是一种新型生物芯片，专门检测特异性蛋白质，但是蛋白质需要染色或标记才能进行检测，国外很多文献都是直接购买已经接好发光基团的蛋白质，而我涉及的蛋白质都比较偏门，需要自己染色。cy5、cy3是最常用，具有相对普遍性，也是仪器设计和易于识别的，但是染色好象不是那么简单，一般的报道这些过程都省略了，而实际中必须用好！ 清楚应助者请斑竹帮我送他3个金币（一个问题一个，呵呵） sunzic@mails.gucas.ac.cn 请勿回答无关话题，谢谢！ 未得到有用答案，继续求助！！！ 谢谢上面各位虫友的热心帮助，还是要继续求助啊！！！ [ Last edited by sunic on 2008-2-22 at 16:23 ] |
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我又查到了一些相关资料，可能接近师兄的最终答案了，但还是没有完全解决，努力ing 1.http://www.iupac.org/goldbook/C01487.pdf 这个文件里是Cy（cyanine dyes）的general formula，但是Cy2，Cy3，Cy5的具体信息还有待寻找。 其他很多文献里的Cy都是有区别的，R2N+=CH[CH=CH]nNR2是通式。 2.下面两段话，是在通用电气找来的 Minimal labeling dyes Size and charge matched 3 colors: Cy2, Cy3, Cy5 label ε-amino group of lysine reactive group：NHS ester Saturation labeling dyes Size matched, neutral charge 2 colors: Cy3, Cy5 label thiol group of cysteine reactive group：Maleimide 我理解的意思是，Ettan DIGE里有两种不同的染料。 一种是叫做“最小标记法染料”，有Cy2，Cy3，Cy5三种，它们的大小匹配，电荷匹配（都带一价正电荷，原因见后）。它们标记ε-NH2，因为ε-NH2带一正电荷，所以被染色后，ε-NH2被标记，没有电荷，而染料带一正电荷，总的来说蛋白的等电点是不变的。reactive group是NHS easter（NHS，丁二酰亚胺） 另一种叫“饱和标记法染料”，有Cy3，Cy5两种，大小匹配，电中性，标记半胱氨酸的巯基。reactive group是maleimide（顺丁烯二酰亚胺） 具体的机理我不明白，师兄根据所提到的基团是不是能推测出来？ [ Last edited by bsksln on 2008-2-22 at 14:42 ] |
9楼2008-02-22 11:15:36
2楼2008-02-20 21:08:48
3楼2008-02-21 03:10:44
sunic
木虫 (著名写手)
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4楼2008-02-21 08:39:04