24小时热门版块排行榜    

查看: 2099  |  回复: 14

Yocan2012

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 花雨sky at 2014-03-19 18:54:34
不就是要收集沉淀的嘛,我加完乙醇和乙酸钠之后沉淀半个小时,离心收集沉淀,再进行乙醇清洗沉淀。要是你加完之后白色絮状物很多的话就可以直接离心收集沉淀,,不用等半个小时了,这种做法的前提是你的DNA量要多。 ...

白色沉淀非常多,然后离心,洗涤,加TE溶解。但是上样跑胶后,就是上面那个死样子。不过,nanodrop上面测的核算浓度却能达到几百纳克每微升。
11楼2014-03-20 09:27:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花雨sky

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by Yocan2012 at 2014-03-20 09:27:01
白色沉淀非常多,然后离心,洗涤,加TE溶解。但是上样跑胶后,就是上面那个死样子。不过,nanodrop上面测的核算浓度却能达到几百纳克每微升。...

估计是杂质含量较高,你的材料里富含多糖、多酚吗,可以在CTAB之前,样品研磨完之后用TE-NaCl清洗几次。
12楼2014-03-20 11:30:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Yocan2012

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 花雨sky at 2014-03-20 11:30:04
估计是杂质含量较高,你的材料里富含多糖、多酚吗,可以在CTAB之前,样品研磨完之后用TE-NaCl清洗几次。...

刚刚又用买来的苯酚提了一次,有很淡的条带了,但是在250 bp和1000 bp位置还是分别有非常亮的条带。我的材料是种子,里面多糖和多酚是比较多。不过我每次都用苯酚抽提2次。并且还发现一个很不理解的现象:在最后加入100%乙醇后,总是分成两层,上层物色,下层呈浅棕色。似乎乙醇和下层的CTAB是不相溶的,且沉淀都在上层物色相中。
13楼2014-03-20 18:06:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花雨sky

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+15, 感谢热心回帖帮助 2014-03-21 21:02:41
引用回帖:
13楼: Originally posted by Yocan2012 at 2014-03-20 18:06:12
刚刚又用买来的苯酚提了一次,有很淡的条带了,但是在250 bp和1000 bp位置还是分别有非常亮的条带。我的材料是种子,里面多糖和多酚是比较多。不过我每次都用苯酚抽提2次。并且还发现一个很不理解的现象:在最后加 ...

加入乙醇之后,没有见过你这样的现象,不过你下层浅棕色是你抽提完上清液的颜色,浅棕色的话就是你的材料已经被氧化了,你是不是没有摇匀就沉淀了呀?既然多酚和多糖含量比较高,那你就用TE-NaCl清洗几次吧。用苯酚抽提的话,要注意最后一次抽提的时候就不要用苯酚了,直接用氯仿。最后加入乙醇之后,轻轻地混匀后再沉淀。
14楼2014-03-21 09:36:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米粒儿308

铁虫 (初入文坛)

你好!我现在也在提植物基因组用于建库测序,我第一次的测序结果出来了,总体还不错,就是里面细胞质DNA含量太高了,占了20%,我用的是CTAB法,我想问下你有没有遇到这个问题?怎样才能减少胞质DNA啊?我的植物材料是拟南芥,谢谢啦
15楼2015-04-10 09:18:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Yocan2012 的主题更新
信息提示
请填处理意见