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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 植物基因组提取
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Yocan2012

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 花雨sky at 2014-03-19 18:54:34
不就是要收集沉淀的嘛，我加完乙醇和乙酸钠之后沉淀半个小时，离心收集沉淀，再进行乙醇清洗沉淀。要是你加完之后白色絮状物很多的话就可以直接离心收集沉淀，，不用等半个小时了，这种做法的前提是你的DNA量要多。 ...

白色沉淀非常多，然后离心，洗涤，加TE溶解。但是上样跑胶后，就是上面那个死样子。不过，nanodrop上面测的核算浓度却能达到几百纳克每微升。
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11楼2014-03-20 09:27:01
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花雨sky

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by Yocan2012 at 2014-03-20 09:27:01
白色沉淀非常多，然后离心，洗涤，加TE溶解。但是上样跑胶后，就是上面那个死样子。不过，nanodrop上面测的核算浓度却能达到几百纳克每微升。...

估计是杂质含量较高，你的材料里富含多糖、多酚吗，可以在CTAB之前，样品研磨完之后用TE-NaCl清洗几次。
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12楼2014-03-20 11:30:04
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Yocan2012

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 花雨sky at 2014-03-20 11:30:04
估计是杂质含量较高，你的材料里富含多糖、多酚吗，可以在CTAB之前，样品研磨完之后用TE-NaCl清洗几次。...

刚刚又用买来的苯酚提了一次，有很淡的条带了，但是在250 bp和1000 bp位置还是分别有非常亮的条带。我的材料是种子，里面多糖和多酚是比较多。不过我每次都用苯酚抽提2次。并且还发现一个很不理解的现象：在最后加入100%乙醇后，总是分成两层，上层物色，下层呈浅棕色。似乎乙醇和下层的CTAB是不相溶的，且沉淀都在上层物色相中。
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13楼2014-03-20 18:06:12
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花雨sky

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+15, 感谢热心回帖帮助 2014-03-21 21:02:41
引用回帖:
13楼: Originally posted by Yocan2012 at 2014-03-20 18:06:12
刚刚又用买来的苯酚提了一次，有很淡的条带了，但是在250 bp和1000 bp位置还是分别有非常亮的条带。我的材料是种子，里面多糖和多酚是比较多。不过我每次都用苯酚抽提2次。并且还发现一个很不理解的现象：在最后加 ...

加入乙醇之后，没有见过你这样的现象，不过你下层浅棕色是你抽提完上清液的颜色，浅棕色的话就是你的材料已经被氧化了，你是不是没有摇匀就沉淀了呀？既然多酚和多糖含量比较高，那你就用TE-NaCl清洗几次吧。用苯酚抽提的话，要注意最后一次抽提的时候就不要用苯酚了，直接用氯仿。最后加入乙醇之后，轻轻地混匀后再沉淀。
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14楼2014-03-21 09:36:08
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米粒儿308

铁虫 (初入文坛)
你好！我现在也在提植物基因组用于建库测序，我第一次的测序结果出来了，总体还不错，就是里面细胞质DNA含量太高了，占了20%，我用的是CTAB法，我想问下你有没有遇到这个问题？怎样才能减少胞质DNA啊？我的植物材料是拟南芥，谢谢啦
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15楼2015-04-10 09:18:03
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