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1楼2014-03-17 20:32:49

songsongsa

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【答案】应助回帖

我觉得这个只是你一个对比度的问题，背景的东西是一直存在的，只不过刚开始有些地方很亮，显微镜显示的时候会自动调节对比度，所以看起来背景是没有东西的，后面荧光bleach了，背景就显出来了。如果可以，试试调节下图像的对比度，把最小和最大强度调成一致，比较下就知道了。或者读一下背景光强，比较一下。

8楼2014-03-21 16:27:42

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myblin

铜虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

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建议你加完H2DCF-DA孵育之后，最好用水洗一下，再进行观察。有时信号会penetration等。因为所有的细胞中都会有ROS，只是量多少的问题。

2楼2014-03-17 21:45:43

liulongbo358

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2楼: Originally posted by myblin at 2014-03-17 21:45:43
建议你加完H2DCF-DA孵育之后，最好用水洗一下，再进行观察。有时信号会penetration等。因为所有的细胞中都会有ROS，只是量多少的问题。

嗯，谢谢您的回答。我在孵育之后使用负载液进行过三次清洗。开始在显微镜下观察时感觉还挺清晰，但是过段时间观察时就感觉没有那么清晰，视野中到处是淡淡的荧光。之前有怀疑是染料出问题了，之后又新买了sigma的新染料做过后，仍然是这样，不知道问题出在哪里。

3楼2014-03-18 08:52:45

liulongbo358

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哦，谢谢您的回答。我是在孵育过后使用负载液清洗的，清洗三次后制片观察。在刚开始置于显微镜下观察时感觉挺清晰的，但是过段时间，也就10几分钟的样子就没有那么清晰了，感觉视野中到处有一层淡淡的荧光。不知是什么原因。之前有怀疑是H2DCF-DA失活了，又重新从sigma新买了染料，但是问题还是一样。这张图还能好一些，其它的对照观察过程中，总是降低的很快，3-10min钟就很快降低了。谢谢您的帮助，还希望大神指点迷津。

4楼2014-03-18 09:01:57