应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 激光共聚焦的在观察拟南芥保卫细胞中ROS的问题
81/1返回列表
查看: 2164  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liulongbo358

铜虫 (小有名气)

[求助] 激光共聚焦的在观察拟南芥保卫细胞中ROS的问题 已有2人参与

在观察拟南芥保卫细胞中ROS时，使用了H2DCF-DA进行30min中孵育后，进行观察，使用leica激光共聚焦进行观察，调好gian值后，图片的背景不知道怎么会逐渐变亮？不知道这是什么问题？请各位大神帮忙看下，3Q。

激光共聚焦的在观察拟南芥保卫细胞中ROS的问题
good_00_ch00.jpg


激光共聚焦的在观察拟南芥保卫细胞中ROS的问题-1
good_10_ch00.jpg


激光共聚焦的在观察拟南芥保卫细胞中ROS的问题-2
good_20_ch00.jpg


激光共聚焦的在观察拟南芥保卫细胞中ROS的问题-3
good_30_ch00.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-17 20:32:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myblin

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议你加完H2DCF-DA孵育之后，最好用水洗一下，再进行观察。有时信号会penetration等。因为所有的细胞中都会有ROS，只是量多少的问题。
赞一下 回复此楼
2楼2014-03-17 21:45:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liulongbo358

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by myblin at 2014-03-17 21:45:43
建议你加完H2DCF-DA孵育之后，最好用水洗一下，再进行观察。有时信号会penetration等。因为所有的细胞中都会有ROS，只是量多少的问题。

嗯，谢谢您的回答。我在孵育之后使用负载液进行过三次清洗。开始在显微镜下观察时感觉还挺清晰，但是过段时间观察时就感觉没有那么清晰，视野中到处是淡淡的荧光。之前有怀疑是染料出问题了，之后又新买了sigma的新染料做过后，仍然是这样，不知道问题出在哪里。
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-18 08:52:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liulongbo358

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by myblin at 2014-03-17 21:45:43
建议你加完H2DCF-DA孵育之后，最好用水洗一下，再进行观察。有时信号会penetration等。因为所有的细胞中都会有ROS，只是量多少的问题。

哦，谢谢您的回答。我是在孵育过后使用负载液清洗的，清洗三次后制片观察。在刚开始置于显微镜下观察时感觉挺清晰的，但是过段时间，也就10几分钟的样子就没有那么清晰了，感觉视野中到处有一层淡淡的荧光。不知是什么原因。之前有怀疑是H2DCF-DA失活了，又重新从sigma新买了染料，但是问题还是一样。这张图还能好一些，其它的对照观察过程中，总是降低的很快，3-10min钟就很快降低了。谢谢您的帮助，还希望大神指点迷津。
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-18 09:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myblin

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liulongbo358 at 2014-03-18 09:01:57
哦，谢谢您的回答。我是在孵育过后使用负载液清洗的，清洗三次后制片观察。在刚开始置于显微镜下观察时感觉挺清晰的，但是过段时间，也就10几分钟的样子就没有那么清晰了，感觉视野中到处有一层淡淡的荧光。不知是 ...

荧光时间会淬灭的，特别是这种比较敏感的燃料。呵呵呵
赞一下 回复此楼
5楼2014-03-18 16:29:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liulongbo358

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by myblin at 2014-03-18 16:29:08
荧光时间会淬灭的，特别是这种比较敏感的燃料。呵呵呵...

哦，是的。我问过这方面的老师，他说荧光会淬灭，但是我们用的激发光不是很强，按照一般情况来说是不会淬灭太严重。但是背景不知道怎么会逐渐变亮？不管怎么后很感谢您的帮助。
赞一下 回复此楼
6楼2014-03-18 23:23:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myblin

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liulongbo358 at 2014-03-18 23:23:48
哦，是的。我问过这方面的老师，他说荧光会淬灭，但是我们用的激发光不是很强，按照一般情况来说是不会淬灭太严重。但是背景不知道怎么会逐渐变亮？不管怎么后很感谢您的帮助。...

呵呵呵，不客气~~~~
赞一下 回复此楼
7楼2014-03-19 12:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songsongsa

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得这个只是你一个对比度的问题，背景的东西是一直存在的，只不过刚开始有些地方很亮，显微镜显示的时候 会自动调节对比度，所以看起来背景是没有东西的，后面荧光bleach了，背景就显出来了。如果可以，试试调节下图像的对比度，把最小和最大强度调成一致，比较下就知道了。或者读一下背景光强，比较一下。
赞一下 回复此楼
8楼2014-03-21 16:27:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liulongbo358 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 总分293求调剂 +6 加一一九 2026-03-25 8/400 2026-03-26 13:30 by yujianx
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 10/500 2026-03-26 13:11 by 公瑾逍遥
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭